EDTA-K2抗凝劑引起血小板減少的結(jié)果探討
【摘要】目的 探討 EDTA 鹽作為抗凝劑的抗凝血在全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)時(shí)發(fā)生血小板假性減少的原因。方法 使用 EDTA 鹽和肝素鋰作為抗凝劑的抗凝血和手工采指血 20μL，同時(shí)制作血涂片一張，通過人工鏡檢對(duì)照。結(jié)果 通過對(duì)3種方法對(duì)血小板測(cè)定結(jié)果對(duì)比分析。結(jié)論 EDTA抗凝劑引起血小板聚集，造成血小板計(jì)數(shù)假性減少。【關(guān)鍵詞】乙二胺四乙酸二鉀 血小板假性減少
在血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀問世以后,檢測(cè)各種血細(xì)胞參數(shù)快速、準(zhǔn)確，給臨床疾病的診斷及治療提供了有診斷價(jià)值的數(shù)據(jù)。乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)作為國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)認(rèn)定的對(duì)血細(xì)胞影響較小的血液抗凝劑,在臨床檢驗(yàn)工作中被廣泛應(yīng)用。但乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)作為抗凝劑的抗凝血全自動(dòng)血液分析儀上檢測(cè)時(shí)引起血小板假性減少的現(xiàn)象[1-2]，在臨床上少見，如果不能及時(shí)診斷和鑒別血小板減少是否乙二胺四乙酸二鉀有關(guān)，會(huì)導(dǎo)致臨床醫(yī)師為診斷明確疾病而給患者增加其他檢查，甚至導(dǎo)致患者的誤診誤治。因此，探討EDTA-K2抗凝劑對(duì)假性血小板減少的影響并探討其解決方法，有著極其重要的意義，為此，筆者對(duì)2008年1月～2011年9月在我科遇見的30例乙二胺四乙酸二鉀引起血小板假性減少的病例進(jìn)行分析，先將結(jié)果總結(jié)如下。
1 材料與方法
1.1 血液來源
所有血液標(biāo)本均來自于我院住院及門診病人，其中5份血液樣本來自糖尿病患者，6份血液樣本來自高血壓患者，6份血液樣本來自腦梗死患者，4份血液樣本來自高脂血癥患者，4份血液樣本來自慢性腎炎患者，5血液樣本來自肝炎患者。共30例，其中男性21例，女性9例，所有患者均無紫癜和出血傾向。
1.2 儀器和試劑
檢測(cè)儀器采用Sysmex公司出產(chǎn)的型號(hào)為XE2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及原廠配套試劑;德國(guó)ZEISS顯微鏡;EDTA-K2抗凝管,肝素鋰抗凝管均由美國(guó)BD公司提供。
1.3 儀器法
分別將抽取的靜脈血2ML置于EDTA-K2和肝素鋰抗凝管，用SysmexXE2100血細(xì)胞分析儀測(cè)定血小板3次，結(jié)果取均值。
1.4 手工法
采集患者新鮮指血20μL，稀釋后按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第3版由我科3位檢驗(yàn)人員進(jìn)行計(jì)數(shù)，結(jié)果取血小板均值。
1.5 瑞氏染色
分別將新鮮指血、EDTA-K2和肝素鋰抗凝血制作成血涂片，每種血液均制作血涂片1張，做瑞氏染色，在顯微鏡下鏡檢觀察。
2 結(jié)果
2.1 EDTA鹽和肝素鋰抗凝血和手工采指血血小板結(jié)果比較 見表1、2。
表1 EDTA鹽和肝素鋰抗凝血和手工采指血血小板結(jié)果比較
制作的血涂片經(jīng)瑞氏染色后鏡檢觀察發(fā)現(xiàn)，EDTA鹽血涂片中可見大量血小板聚集，肝素鋰作為抗凝劑的血涂片和手工采指血的血涂片中血小板散在分布。 3 討論
以上30例患者中，使用SysmexXE2100血細(xì)胞分析儀測(cè)定EDTA鹽作為抗凝劑的抗凝血顯示血小板顯著減少，再用該血液樣本制作血涂片在顯微鏡下觀察見血小板聚集現(xiàn)象非常嚴(yán)重，而使用SysmexXE2100血細(xì)胞分析儀測(cè)定用肝素鋰作為抗凝劑的抗凝血顯示血小板數(shù)正常，同時(shí)手工采指血計(jì)數(shù)血小板數(shù)也正常，所有患者均無紫癜和出血傾向，血漿凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶時(shí)間(TT)均在參考值范圍之內(nèi)，這提示：EDTA鹽作為抗凝劑的抗凝血可出現(xiàn)假性血小板減少。
EDTA-K2常被作為靜脈血液樣本進(jìn)行血常規(guī)測(cè)定的最適宜抗凝劑, EDTA鹽作為抗凝劑其原理是EDTA鹽與血液中的凝血因子IV（鈣離子）結(jié)合成螯合物，而使得其失去凝血作用，阻止靜脈血液凝固，故對(duì)血細(xì)胞形態(tài)影響很小，適用于全血細(xì)胞分析，但它偶爾會(huì)導(dǎo)致血小板聚集，從而引起血小板假性減少[3]。到目前為止,EDTA鹽作為抗凝劑引起血小板計(jì)數(shù)假性減少的發(fā)病機(jī)制并不是很清楚，可能與患者的基因或者染色體異常遺傳有關(guān)，也可能由于患者血漿中存在血小板抗體或者自身抗體有關(guān)，此現(xiàn)象并沒有病理和生理意義。但是也有可能與EDTA導(dǎo)致患者血液中的血小板活化，因而改變血小板膜表面某種隱匿性抗原構(gòu)象，與血漿中的自身抗體結(jié)合，從而激活PLA、AA、PLC、ADP及5-HT等活性物質(zhì)，而這些被激活的活性物質(zhì)又能活化血小板纖維蛋白原受體，促使血小板與纖維蛋白原聚集成團(tuán)，出現(xiàn)血小板大量聚集現(xiàn)象。這種EDTA依賴的冷抗血小板自身抗體直接作用于血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa上，同時(shí)，這種與血小板結(jié)合的自身抗體的Fc端可與單核細(xì)胞或淋巴細(xì)胞膜上Fc受體結(jié)合，出現(xiàn)衛(wèi)星現(xiàn)象。另外，血小板聚集呈衛(wèi)星現(xiàn)象也與血液樣本所在環(huán)境的室內(nèi)溫度有關(guān)，環(huán)境的室內(nèi)溫度越低，衛(wèi)星現(xiàn)象越嚴(yán)重[4-5]。
綜上所述，對(duì)于血液樣本檢測(cè)結(jié)果中血小板＜50×109/L紅細(xì)胞和白細(xì)胞數(shù)量基本正常，血漿凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶時(shí)間(TT)均在參考值范圍之內(nèi)，對(duì)于這類患者，我們應(yīng)及時(shí)和臨床醫(yī)師進(jìn)行溝通，了解患者的全身情況，在患者均無紫癜和出血傾向的情況下，及時(shí)制作血涂片進(jìn)行染色，觀察患者血液中血小板是否有聚集現(xiàn)象，同時(shí)進(jìn)行手工計(jì)數(shù)，避免因使用EDTA鹽作為抗凝劑造成血小板假性減少，從而采取過多的檢查和治療針對(duì)血小板減少，浪費(fèi)大量的人力、物力，導(dǎo)致誤診誤治，甚至延誤患者的治療。
血小板計(jì)數(shù)變化在血栓與出血性疾病的診斷與治療中有著重要的作用,在臨床檢驗(yàn)工作中，我們發(fā)現(xiàn) SysmexXE2100血細(xì)胞分析儀大多數(shù)情況下會(huì)提示抗凝劑所致血小板假性減少病例,但也有極少數(shù)情況下SysmexXE2100血細(xì)胞分析儀不提示血小板聚集現(xiàn)象。因此，在臨床檢驗(yàn)科工作中，對(duì)于首次檢測(cè)血小板減低的血液樣本均應(yīng)認(rèn)真分析其血小板直方圖,看有無擬合曲線、翹尾現(xiàn)象或血小板聚集警告提示,并制作血涂片染色進(jìn)行顯微鏡下觀察, 看有無血小板聚集成堆現(xiàn)象或血小板衛(wèi)星現(xiàn)象,并再次采集患者血液樣本對(duì)檢測(cè)項(xiàng)目進(jìn)行復(fù)查, 以免導(dǎo)致臨床誤診誤治,給患者及家屬帶來巨大的精神壓力和痛苦。
參 考 文 獻(xiàn)
[1] 劉春生,柳發(fā)虎,浦春,楊淳,張桂花.不同抗凝劑對(duì)血小板檢測(cè)結(jié)果的影響.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2011,8(8):899-890.
[2] 劉振玲.6例EDTA-K2致假性血小板減少實(shí)驗(yàn)分析.醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐,2011, 24(9):1062-1063.
[3] 盧曉燕,趙利鵬,徐萍. EDTA抗凝劑引起血小板計(jì)數(shù)假性減少的原因探討.中國(guó)醫(yī)藥指南,2010,8(34):272-273.
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[5] 王平,周金,岳秀玲,王蘇平,吳靜. EDTA 抗凝劑導(dǎo)致的血小板減少分析.中國(guó)誤診學(xué)雜志,2010,10(31):7665.
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