Tie2在鼠急性肺損傷中的表達(dá)及意義

【摘要】  目的 探討Tie?2在急性肺損傷（acute Iung injury,ALI）中的表達(dá)及意義。方法 24只Wistar大鼠隨機(jī)分為對照組與模型組，每組各12只，對照組采用假手術(shù)處理，模型組采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)（cecal ligation and puncture,CLP）制作ALI模型，分別于假手術(shù)及CLP術(shù)后12 h處死全部大鼠，取右肺石蠟包埋，行HE染色，采用免疫組織化學(xué)法檢測Tie?2在鼠肺組織中的表達(dá)分布。結(jié)果 對照組在支氣管上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)Tie?2。模型組在肺泡間隔及肺泡腔內(nèi)中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞均有強(qiáng)陽性的表達(dá)，在Tie?2陽性的炎癥細(xì)胞附壁區(qū)域，內(nèi)皮細(xì)胞Tie?2表達(dá)亦增強(qiáng)，支氣管上皮細(xì)胞表達(dá)相對減弱，平滑肌細(xì)胞表達(dá)未見明顯差別。結(jié)論 ALI模型鼠肺組織中中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞表達(dá)Tie?2，同時內(nèi)皮細(xì)胞Tie?2表達(dá)增強(qiáng)。

【關(guān)鍵詞】  急性肺損傷； Tie?2；盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)

    【Abstract】  Objective  To explore expression and significance of and Tie?2 receptor in a rat model of acute lung injury. Methods  The rat model of acute lung injury(ALI) was made by cecal ligation and puncture(CLP). Wistar rats were devided into control group and model group,and were killed 12 hours after shaming or CLP. Right lungs were embedded in paraffin.The expression and distribution of Tie?2 receptors in lung was observed by Immunohistochemistry. Results  Tie?2 receptors were expressed in bronchial epithelial cells，smooth muscle cells and endothelial cells in control group.There were higher expressions on neutrophils and macrophages in lung interstitial and alveolar space. In adhesion location of Tie?2 receptors positive inflammatory cells,there was higher staining in endothelial cells, whereas there were relatively decreased expressions on bronchial epithelial cells. There were no distinct difference on smooth muscle cells between two groups.Conclusion  Neutrophils and macrophages express Tie?2 receptors,and meanwhile endothelial cells have higher expressions in the lung of the rat model of acute lung injury.

    【Key words】  acute lung injury,Tie?2,cecal ligation and puncture

    急性肺損傷（Acute Lung Injury,ALI）常是嚴(yán)重感染中毒癥(severe sepsis)的嚴(yán)重并發(fā)癥，病理上表現(xiàn)為肺部大量炎性細(xì)胞的浸潤，肺水腫的形成。Tie?2為血管生成素（Angiopoietin,Ang）家族受體，研究發(fā)現(xiàn)Tie?2在炎癥反應(yīng)中起重要作用，在鼠ALI模型中存在Tie?2表達(dá)下降及磷酸化受阻現(xiàn)象［1］，但其具體表達(dá)分布不明。本研究通過盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)（cecal ligation and puncture,CLP）誘導(dǎo)sepsis制作鼠ALI模型，檢測Tie?2在ALI鼠肺臟中的表達(dá)分布并探討其在ALI中的意義。

    1  材料與方法

    1.1  實(shí)驗(yàn)主要試劑  濃縮型Tie?2兔抗鼠多克隆抗體、sABC試劑盒及DAB顯色試劑盒均購自中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

    1.2  實(shí)驗(yàn)分組  健康清潔級成年雄性Wistar大鼠24只（山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供），隨機(jī)分為兩組，對照組12只，模型組12只。

    1.3  ALI大鼠模型制備及標(biāo)本處理

    1.3.1  ALI大鼠模型制備：術(shù)前大鼠禁食12 h，禁水8 h，3%水合氯醛行腹腔麻醉，75%乙醇消毒腹部，沿腹白線中段作一長1.5 cm的切口,剪開皮膚和肌層，探查腹腔分離盲腸，在距盲腸末端1 cm處用3?0絲線結(jié)扎盲腸，注意避免結(jié)扎盲腸動脈及引起腸梗阻，用16 G穿刺針在盲腸游離面（腸系膜對面）上貫穿3次，針孔間距約3 mm，并擠出少許內(nèi)容物，還納腸管。術(shù)畢逐層關(guān)腹，并于腹壁皮下注射林格液3 ml /100 g抗休克處理。術(shù)后自由進(jìn)食飲水。對照組僅做無菌開腹與盲腸翻動。

    1.3.2  標(biāo)本處理：分別于假手術(shù)及CLP術(shù)后12 h處死全部大鼠，剪取右肺組織，常規(guī)石蠟包埋，HE染色觀察肺部病理變化，免疫組化sABC法觀察Tie?2表達(dá)分布，具體步驟按試劑盒說明操作。

    2  結(jié)果

    2. 1  肺組織病理學(xué)變化  對照組大鼠肺臟光鏡下肺組織結(jié)構(gòu)清楚，肺間質(zhì)有僅有少許炎性細(xì)胞，肺泡壁結(jié)構(gòu)完整，肺泡內(nèi)未見水腫液及肺泡萎陷（圖1）。模型組光鏡下見肺泡間隔增厚，肺間質(zhì)充血水腫，大量中性粒細(xì)胞及少量巨噬細(xì)胞浸潤，部分肺泡萎縮塌陷（圖2）。

    2.2  免疫組化病理結(jié)果分析  對照組Tie?2主要表達(dá)于支氣管上皮細(xì)胞（圖3）、內(nèi)皮細(xì)胞（圖4），在支氣管及血管平滑肌細(xì)胞亦有較弱的表達(dá)，肺泡腔未見有明顯陽性表達(dá)細(xì)胞（圖5）。模型組支氣管上皮細(xì)胞表達(dá)相對減弱（圖6），在Tie?2陽性的炎癥細(xì)胞附壁區(qū)域，內(nèi)皮細(xì)胞Tie?2表達(dá)增強(qiáng)（圖7），在肺泡間隔及肺泡腔內(nèi)中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞均有強(qiáng)陽性的表達(dá)（圖8），平滑肌細(xì)胞表達(dá)未見明顯差別。

    3  討論

    眾多肺內(nèi)外因素均可引起ALI，其中sepsis是重要的肺外因素。CLP術(shù)由腸源性感染誘導(dǎo)sepsis致ALI，能較好的模擬疾病的自然病理生理過程。本實(shí)驗(yàn)大鼠在CLP術(shù)后12 h肺臟病理變化以肺泡中隔變化為主，表現(xiàn)肺間質(zhì)充血水腫，大量中性粒細(xì)胞及少量巨噬細(xì)胞浸潤，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，與國外的模型報道相符［2］。Tie?2廣泛表達(dá)于成人脈管系統(tǒng)中［3］，對維持正常血管完整性有重要作用。Tie?2配體包括Ang?1、Ang?2、Ang?4，其中Ang?1可以激動Tie?2，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移，拮抗凋亡，募集血管周圍支持細(xì)胞，穩(wěn)定血管，防止?jié)B漏，Ang?2作用較復(fù)雜，通常認(rèn)為可以抑制Tie?2，對血管起去穩(wěn)定作用，但在體外實(shí)驗(yàn)中高濃度或長時間刺激Tie?2時也可激動受體［4，5］，Ang?4可以激動Tie?2，但研究較少。最新的研究表明,Ang/Tie?2系統(tǒng)在炎癥反應(yīng)內(nèi)皮細(xì)胞活化中起重要作用［6］。

  Lemieux等［7］通過RT?PCR、免疫組化及共聚焦顯微鏡首次發(fā)現(xiàn)Tie?2表達(dá)于中性粒細(xì)胞，且Ang?2可以較弱的激動中性粒細(xì)胞Tie?2。在內(nèi)皮細(xì)胞Tie?2的活化可誘導(dǎo)P選擇素的定位，導(dǎo)致中性粒細(xì)胞粘附能力的增加，而中性粒細(xì)胞Tie?2活化可以進(jìn)一步增強(qiáng)其粘附能力。本研究亦發(fā)現(xiàn)在Tie?2陽性的中性粒細(xì)胞附壁區(qū)域，內(nèi)皮細(xì)胞Tie?2亦染色增強(qiáng)，提示兩者Tie?2可能同時存在活化現(xiàn)象。

    Murdoch等［8］通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)低氧血癥能上調(diào)單核細(xì)胞?巨噬細(xì)胞較強(qiáng)強(qiáng)度表達(dá)Tie?2，其中組織巨噬細(xì)胞有著最強(qiáng)的表達(dá)，推斷Ang?2可能趨化Tie?2陽性單核細(xì)胞的游走至炎癥區(qū)或腫瘤組織，易化血管新生。本研究亦發(fā)現(xiàn)肺泡巨噬細(xì)胞高強(qiáng)度的表達(dá)Tie?2，在大血管及支氣管粘膜下層亦有陽性表達(dá)Tie?2的巨噬細(xì)胞，這些細(xì)胞作用仍不清楚，是否與ALI損傷后組織修復(fù)有關(guān)有待進(jìn)一步研究。

    綜上所述，本研究表明ALI時肺組織中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞表達(dá)Tie?2，同時內(nèi)皮細(xì)胞Tie?2表達(dá)增強(qiáng)，Tie?2參與了ALI的病變過程。

【參考文獻(xiàn)】
  ［1］ Mahroo M,Thamir N,Salman Q,et al.Regulation of angiopoietin expression by bacterial lipopolysaccharide［J］.Am J Physiol lung Cell Mol Physiol, 2008, 294 (5): L955?963.

［2］ Ozturk E,Demirbilek S,Bege Z,et al.Does leflunomide attenuate the sepsis?induced acute lung injury［J］.Pediatr Surg Int,2008,24:899?905.

［3］ Wong AL,Haroon ZA,Werner S,et al.Tie2 expression and phosphorylation in angiogenic and quiescent adult tissues［J］.Circ Rep，1997,81:567?74.

［4］ Korff T，Kimmina S, Martiny?Baron G,et al.Blood vessel maturation in a 3?dimensional spheroidal coculture model: direct contact with smooth muscle cells regulates endothelial cell quiescence and abrogates VEGF responsiveness［J］.FASEB J,2001,15(2):447?457.

［5］ Teichert?Kuliszewska K, Maisonpierre PC, Jones N,et al.Biological action of angiopoietin?2 in a fibrin matrix model of angiogenesis is associated with activation of Tie2［J］.Cardiovasc Res，2001,49:659?670.

［6］ Fiedler U,Reiss Y,Scharpfenecker M,et al.Angiopoietin?2 sensitizes endothelial cells to TNF?alpha and has a crucial role in the induction of inflammation［Ｊ］.Nat MED, 2006, 12(2):171?172.

［7］ Lemieux CR,Maliba J,Favier JF,et al.Angiopoietins can directly activate endothelial cells and neutrophils to promote proinflammatory responses［J］.Blood, 2005,105 (4):1523?1530.

［8］ Murdoch C,Tazzymans,Webster S,et al.Expression of Tie?2 by human monocytes and their responses to angiopoietin?2［J］.J Immunol, 2007,178(11):7405?7411.

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