中醫(yī)藥治療呼吸道合胞病毒感染實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展教育論文
【摘要】
按照體內(nèi)體外不同研究途徑，對(duì)近年來(lái)中醫(yī)藥治療呼吸道合胞病毒（RSV）感染的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，為以后相關(guān)研究進(jìn)行展望。認(rèn)為應(yīng)該加強(qiáng)抗病毒作用環(huán)節(jié)和免疫學(xué)相關(guān)機(jī)制研究，以求開(kāi)發(fā)針對(duì)RSV感染的抗病毒、提高機(jī)體抗病能力的新藥，進(jìn)而產(chǎn)生新的中醫(yī)藥理論來(lái)指導(dǎo)RSV的臨床治療。
【關(guān)鍵詞】
呼吸道合胞病毒；實(shí)驗(yàn)研究；文獻(xiàn)綜述
呼吸道合胞病毒( Respiratory syncytial virus,RSV)是導(dǎo)致嬰幼兒下呼吸道感染最重要的病原,能引起支氣管炎、毛細(xì)支氣管炎、呼吸道合胞病毒肺炎等疾病，尚可誘發(fā)過(guò)敏癥和哮喘[1-2]，某些體弱患兒可發(fā)生心力衰竭等危重情況，甚至可導(dǎo)致患兒死亡，嚴(yán)重危害嬰幼兒健康,西醫(yī)尚無(wú)安全有效的疫苗和藥物控制[3]。中醫(yī)藥在抗RSV感染方面有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，多項(xiàng)臨床研究證實(shí)其療效顯著，進(jìn)一步闡釋相關(guān)機(jī)理并開(kāi)發(fā)安全有效的抗RSV感染藥物有重大意義。本文僅就近年來(lái)中醫(yī)藥治療RSV感染的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展綜述如下。
1 體外實(shí)驗(yàn)研究
1.1單味藥物研究
1.1.1藥物有效成分實(shí)驗(yàn)研究
梁榮感等[4]觀察大黃蒽醌類(lèi)化合物對(duì)RSV引起的細(xì)胞病變(CPE)的抑制作用,結(jié)果證實(shí)其對(duì)RSV抑制作用存在明顯的量效反應(yīng)關(guān)系，證實(shí)RAA在人喉癌細(xì)胞（Hep|2）中對(duì)RSV有抑制作用。張鳳梅等[5]通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)法觀察敗醬草抗病毒多糖AP4對(duì)RSV感染人宮頸癌細(xì)胞（Hela）的治療作用，發(fā)現(xiàn)AP4抑制RSV的半數(shù)有效濃度(EC50)為0.097 mg/mL,治療指數(shù)(TI)為114,證實(shí)敗醬草抗病毒有效部位AP4在Hela細(xì)胞中對(duì)呼吸道合胞病毒有明顯的抑制作用。王意忠等[6]采用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，利用CPE法觀察梔子提取物ZG對(duì)RSV等6種呼吸道病毒致細(xì)胞病變的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,體外抗病毒試驗(yàn)中, 梔子提取物ZG 對(duì)RSV、甲型流感病毒等所致細(xì)胞病變有明顯抑制作用。王秀琴等[7]采用煎煮法、二氯甲烷萃取法和柱層析法提取分離得到甘草抗病毒有效部位(GD4)，觀察GD4在Hela細(xì)胞中對(duì)RSV的抑制作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)GD4對(duì)RSV的抑制作用存在量效關(guān)系；在感染后至少12 h以內(nèi)給藥, GD4能夠有效抑制RSV的復(fù)制。認(rèn)為GD4在Hela細(xì)胞中對(duì)RSV有明顯的抑制作用。
1.1.2含藥血清實(shí)驗(yàn)研究
楊潔等[8]采用水提醇沉法提取中藥黃芩有效成分，采用觀察細(xì)胞病變和MTT法,觀察清熱抗感沖劑及其含藥血清在Hep|2細(xì)胞中抑制RSV的作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芩提取物及其含藥血清具有不同程度抑制RSV病毒復(fù)制的作用。趙宇紅等[9]采用MTT比色法檢測(cè)魚(yú)腥草對(duì)Hep|2單層細(xì)胞的毒性作用,通過(guò)空斑試驗(yàn)和試管觀察細(xì)胞病變法確定魚(yú)腥草對(duì)RSV的抑制作用。結(jié)果顯示魚(yú)腥草(1∶10)可以完全抑制稀釋度為10-5(100 CID50)的RSV、半數(shù)抑制10-4(1 000 TCID50)的RSV,可使空斑明顯變小，認(rèn)為魚(yú)腥草注射液對(duì)RSV有體外抑制作用。
1.2 中藥復(fù)方機(jī)理實(shí)驗(yàn)研究
1.2.1藥物有效成分實(shí)驗(yàn)研究
楊道鋒等[10]觀察復(fù)方抗病毒制劑作用后的病毒對(duì)細(xì)胞的攻擊作用，結(jié)果顯示復(fù)方抗病毒制劑能抑制流感病毒的血凝活性和RSV對(duì)靶細(xì)胞的攻擊作用，認(rèn)為復(fù)方抗病毒制劑體外對(duì)流感病毒和RSV具有較強(qiáng)的抑制作用。王孟清等[11]將RSV接種于Hela細(xì)胞單層增殖，取不同濃度的截哮口服液藥液加入病毒,觀察在細(xì)胞單層上的空斑形成以判定病毒產(chǎn)量。結(jié)果截哮口服液使RSV產(chǎn)量減少,藥物濃度的高低與病毒產(chǎn)量的高低呈明顯的負(fù)相關(guān)；其對(duì)RSV有直接滅活作用，且能影響病毒的吸附與吸附后的復(fù)制過(guò)程。王桂亭等[12]通過(guò)銀黃直接抗病毒、病毒感染細(xì)胞同時(shí)使用銀黃、先使用銀黃再感染病毒3種給藥方法,觀察Hep|2和Hela細(xì)胞病變效應(yīng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)注射用銀黃在Hep|2和Hela細(xì)胞上對(duì)RSV均有明顯的抗病毒作用。認(rèn)為注射用銀黃對(duì)RSV具有抑制和直接殺滅的特異性。
馮旰珠等[13]以CPE法及四氮唑鹽還原法(MTT法)比較不同藥物濃度及不同給藥方式下熱毒寧對(duì)RSV的抑制作用效果，發(fā)現(xiàn)熱毒寧注射液預(yù)防給藥方式、細(xì)胞外直接滅活及治療給藥方式均有抗RSV作用,該抑制作用存在著明顯的量效反應(yīng)關(guān)系。認(rèn)為熱毒寧對(duì)RSV有直接滅活作用,對(duì)RSV侵入Hep|2細(xì)胞有阻斷作用,對(duì)RSV在Hep|2細(xì)胞內(nèi)增殖有抑制作用,相同濃度下,預(yù)防作用更顯著。葉卉初等[14]將Hep|2細(xì)胞分成病毒唑、咳喘平、病毒唑+咳喘平3組,運(yùn)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，各細(xì)胞組加入RSVLong株病毒并分別加入上述3種藥物的稀釋液，通過(guò)觀察CPE來(lái)觀察RSV的抑制作用。試驗(yàn)表明,在用藥量降至1/4時(shí),在Hep|2細(xì)胞上連續(xù)觀察5 d,仍不產(chǎn)生細(xì)胞病理變化,對(duì)RSV有完全抑制作用。說(shuō)明兩藥聯(lián)合應(yīng)用時(shí)產(chǎn)生了很強(qiáng)的協(xié)同作用。
1.2.2含藥血清實(shí)驗(yàn)研究
汪受傳等[15]用不同劑量的清肺口服液制成含藥血清處理RSV感染后的Hep|2細(xì)胞,用組織細(xì)胞培養(yǎng)法,采用CPE觀察和MTT法檢測(cè)清肺口服液含藥血清對(duì)RSV感染細(xì)胞的增殖抑制作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在Hep|2細(xì)胞上,清肺口服液的最大無(wú)毒濃度為1∶9。100 TCID50 RSV攻擊后Hep|2細(xì)胞的OD值明顯降低,加入中、高劑量含藥血清后OD值升高。證實(shí)清肺口服液含藥血清對(duì)RSV有抑制作用。廖輝等[16]在組織培養(yǎng)半數(shù)感染量以及含藥血清對(duì)細(xì)胞最大無(wú)毒濃度測(cè)定基礎(chǔ)上，行溫度轉(zhuǎn)換試驗(yàn)。結(jié)果顯示：溫度轉(zhuǎn)換前（黏附階段）加入金欣口服液含藥血清，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組OD值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義；溫度轉(zhuǎn)換后（侵入階段）加入金欣口服液,含藥血清組OD值明顯升高，與對(duì)照組比較差異有高度統(tǒng)計(jì)意義（P<0.01）。認(rèn)為金欣口服液含藥血清的抗病毒作用在RSV黏附后的膜融合及侵入階段。廖輝等[17]將人胚肺成纖維細(xì)胞分組,RSV病毒攻擊后,利用電鏡觀察各組人胚肺成纖維細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果表明:病毒感染組細(xì)胞核增大,核質(zhì)比增加,核仁凝聚,核膜凹陷成夾層,包涵體形成,線粒體凝聚,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張,溶酶體增多,核染色質(zhì)濃縮,細(xì)胞外可見(jiàn)病毒顆粒。含藥血清感染后給藥組,細(xì)胞核增大,核仁凝聚,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張,線粒體凝聚,但程度較輕。證實(shí)RSV感染人胚肺成纖維細(xì)胞后,細(xì)胞可出現(xiàn)超微結(jié)構(gòu)的改變,清肺口服液含藥血清可以減輕這種改變,感染時(shí)給藥比感染后給藥作用更明顯。莫紅纓等[18]以ELISA法測(cè)定炎癥介質(zhì)的含量,觀察復(fù)方雙黃連及其含藥血清以不同的給藥方式對(duì)RSV刺激A549細(xì)胞引發(fā)的炎癥介質(zhì)IL|8、IL|6、TNF|α釋放的作用。研究發(fā)現(xiàn)雙黃連復(fù)方及其含藥血清均能顯著降低RSV誘導(dǎo)A549釋放的IL|8水平,并以感染前給藥的途徑下調(diào)IL|8的作用最為明顯，在病毒感染的氣道炎癥控制中起著一定的作用。
2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究
2.1 病毒抑制作用研究
徐霞等[19]用金貝清肺顆粒不同劑量給雄性BALB/C小鼠灌胃，3 d后鼻腔接種RSV，繼續(xù)給藥7 d，動(dòng)物眼靜脈叢取血,牽頸臼處死,無(wú)菌取肺組織,做肺組織病毒含量檢測(cè)。結(jié)果顯示，金貝清肺顆粒4個(gè)劑量組動(dòng)物的肺組織病毒含量與模型對(duì)照組比較下降均超過(guò)一個(gè)指數(shù)。表明金貝清肺顆粒對(duì)小鼠體內(nèi)RSV具有明顯的抑制作用。吳成林等[20]在小鼠體內(nèi)觀察雙黃連口服液對(duì)RSV染毒小鼠的死亡保護(hù)作用以及對(duì)小鼠心、腦、肺內(nèi)病毒增殖的影響,發(fā)現(xiàn)雙黃連口服液能抑制RSV的增殖,并見(jiàn)病毒的感染性滴度隨藥物濃度的增加而下降；治療RSV感染鼠結(jié)果發(fā)現(xiàn),雙黃連口服液對(duì)RSV感染鼠有保護(hù)作用,隨著藥物劑量增加,療效增強(qiáng)；該口服液還能降低組織內(nèi)病毒滴度,阻止體內(nèi)病毒復(fù)制,抗RSV作用類(lèi)似于同劑量的病毒唑。
2.2 免疫功能調(diào)節(jié)作用機(jī)制研究
夏泉等[21]在小鼠感染RSV的同時(shí),各給藥組分別灌胃利巴韋林和莪術(shù)油油溶液,腹腔注射莪術(shù)油葡萄糖注射液。按肺質(zhì)量除以體質(zhì)量逐個(gè)計(jì)算肺指數(shù)（LI）和各組肺指數(shù)抑制率。結(jié)果表明，病毒對(duì)照組小鼠的LI明顯增加，應(yīng)用莪術(shù)油油溶液后,動(dòng)物L(fēng)I明顯減低,治療效果呈現(xiàn)較顯著的劑量相關(guān)性。且高劑量莪術(shù)油油溶液治療效果優(yōu)于利巴韋林。此外，莪術(shù)油葡萄糖注射液和利巴韋林對(duì)RSV 感染小鼠的LI也具有明顯的降低作用。鄭淑梅等[22]對(duì)60例RSV肺炎患兒外周血T細(xì)胞亞群及血清白細(xì)胞介素-2水平進(jìn)行測(cè)定，應(yīng)用雙黃連粉劑靜滴治療7 d，療程結(jié)束后復(fù)查發(fā)現(xiàn)患兒CD+4、CD+4/CD+8及血清IL|2水平升高，CD+8降低，認(rèn)為雙黃連可調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群平衡、增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能，對(duì)疾病康復(fù)有促進(jìn)作用。
3結(jié)語(yǔ)
RSV感染對(duì)小兒和部分免疫功能低下的成年人健康構(gòu)成較大威脅，日益為人們重視。中醫(yī)藥在抗RSV感染中展示了自身獨(dú)有的優(yōu)勢(shì)，對(duì)其作用機(jī)制也進(jìn)行了積極的探索。隨著研究的不斷深入，細(xì)胞培養(yǎng)、MTT、血清藥理學(xué)方法等研究手段逐漸為人們所熟知，細(xì)胞因子對(duì)炎癥部位細(xì)胞凋亡機(jī)制的影響等分子生物學(xué)方面的研究也正為更多的研究人員所接受，但仍存在著研究方法單一、研究指標(biāo)落后、研究思路和方法缺乏創(chuàng)新性等諸多問(wèn)題。在抑制病毒的作用研究中，多是通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞病變改善的程度來(lái)描述藥物的抗病毒作用，對(duì)于其具體作用環(huán)節(jié)尚缺乏詳盡的研究，值得我們進(jìn)一步深入探討�？上驳氖且恍┥锘瘜W(xué)、免疫學(xué)等相關(guān)專(zhuān)業(yè)科研人員從研制新的有效單體等角度進(jìn)行探索，為進(jìn)一步揭示藥物抗病毒規(guī)律及免疫學(xué)相關(guān)機(jī)制提供了新的方法，為中醫(yī)藥學(xué)的整體發(fā)展注入了新的力量，提供了新的思路。當(dāng)前研制開(kāi)發(fā)安全可靠的防治RSV感染的新藥,仍是國(guó)際醫(yī)學(xué)界有待解決的重要課題之一。
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