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淺析制作漿膜腔積液細胞塊的最優(yōu)方法
細胞塊技術(shù)基本原理是將樣品離心，使其中的細胞和微小組織塊濃縮后固定，石蠟包埋后切片染色觀察，下面是小編搜集整理的一篇探究制作漿膜腔積液細胞塊方法的論文范文，供大家閱讀查看。
漿膜腔積液是臨床中最為常見的一種體征，炎癥和腫瘤是引起積液的主要原因。積液性質(zhì)的診斷以往主要通過涂片進行，但是由于常規(guī)涂片法存在涂片厚、細胞重疊、結(jié)構(gòu)不清、細胞量少、陽性檢出率低等缺點[1-2],使得診斷的敏感性僅為50%~78%[3].細胞塊技術(shù)基本原理是將樣品離心，使其中的細胞和微小組織塊濃縮后固定，石蠟包埋后切片染色觀察。細胞塊通過石蠟包埋后類似組織塊，可以連續(xù)切片及永久性保存標(biāo)本，彌補了傳統(tǒng)涂片的不足，還可以進行進一步相關(guān)檢測。關(guān)于細胞塊技術(shù)的應(yīng)用在文獻中可見零星報道，制備方式也各異，本研究通過對比四種漿膜腔積液細胞塊制作方法，試圖找到一種更適合基層醫(yī)院推廣開展的細胞塊制作方法。
1材料與方法
1.1材料收集桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2010-2012年間的漿膜腔積液標(biāo)本80例，積液量50~200ml,其中胸腔積液53例，腹腔積液27例，樣本包含略渾濁的積液35例為第一組;血性積液或渾濁的積液45例為第二組。
1.2方法把每例樣本分作4份，按下列步驟進行操作：所有樣本在一次性10ml塑料試管中離心2000r/min,離心5min,之后將沉淀部分做以下處理①將試管內(nèi)上清液去除，加入適量95%乙醇之后再次離心2000r/min、5min,去除上清液之后，用手術(shù)剪在距試管底部沉淀物上方0.1~0.2cm處剪去上段試管，再將試管底部剪出一個小口子，便于脫水劑穿透。將裝有沉淀物的試管底端用拭鏡紙包好后放入包埋盒中(試管包埋法).②將試管內(nèi)上清液去除，盡可能用鑷子將在底部的沉淀物取出，用拭鏡紙包好后放入包埋盒中(普通離心沉淀法).③將試管內(nèi)上清液去除，用濾紙盡可能吸去多余水分，在其中加入人血清液混勻后再次離心，取沉淀物用拭鏡紙包好后放入包埋盒中。④將試管內(nèi)上清液去除，用濾紙盡可能吸去多余水分，在其中加入適量融化的瓊脂混勻，待冷凝固后，取出沉淀物放入包埋盒中。以上4種細胞塊制作完成后，均放入95%乙醇中固定1h,經(jīng)過常規(guī)脫水透明，包埋，HE制片。
1.3結(jié)果判定
1.3.1成功率判定細胞沉渣能夠制作成細胞塊，沉渣大部分能夠聚攏在2cm×2cm的范圍內(nèi)，并能夠制成切片就認(rèn)定為制作細胞塊成功，可以允許有一些沉渣散落。
1.3.2細胞塊完整性判斷細胞蠟塊制成后，細胞保留完整，結(jié)合性較好，幾乎沒有或及有少量的散落細胞，能夠完整制片，即為具有完整性。
1.4統(tǒng)計學(xué)分析所得數(shù)據(jù)，應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計軟件進行處理，各組間比較應(yīng)用χ2檢驗。
2結(jié)果
2.1細胞塊制作成功率對比
2.1.1第一組35例略渾濁的漿膜腔積液經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，35例略渾濁的漿膜腔積液細胞塊制作的4種方法成功率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=27.47,P<0.01).其中試管包埋法與普通離心沉淀法、血清凝聚法，普通離心沉淀法與瓊脂凝聚法、普通離心沉淀法與血清凝聚法成功率的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=21.25、4.79、16.73、6.94,P<0.01或<0.05);而試管包埋法與瓊脂凝聚法，血清凝聚法與瓊脂凝聚法制作成功率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.40、2.52,P>0.05).(表1,圖1,圖2)
2.1.2第二組45例血性或渾濁的漿膜腔積液經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，45例血性或渾濁的漿膜腔積液細胞塊制作成功率的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，其中普通離心沉淀法與試管包埋法、血清凝聚法、瓊脂凝聚法成功率的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2均為3.10,P>0.05).(表2,圖3,圖4)
2.2細胞塊制做完整性對比四種方法制作成功的所有細胞塊包括：試管包埋法75例，普通離心沉淀法53例，血清凝聚法67例，瓊脂凝聚法73例。
經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，細胞塊制作的4種方法完整率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=64.17,P<0.01).其中試管包埋法與普通離心沉淀法、血清凝聚法;普通離心沉淀法與血清凝聚法、瓊脂凝聚法;血清凝聚法與瓊脂凝聚制作方法完整率的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2值=39.63、3.97、20.32、41.23、4.91,P<0.01或P<0.05);而試管包埋法與瓊脂凝聚法制作完整率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.07,P>0.05)(表3).
3討論
傳統(tǒng)涂片中細胞量少、涂片重疊、需要觀察范圍很大，容易導(dǎo)致漏診，而且對于細胞形態(tài)不典型的間皮細胞、轉(zhuǎn)移癌細胞，尤其是對散在的癌細胞的鑒別時常很困難。文獻報道有高達12%的病例會遇到間皮細胞與癌細胞難以鑒別的狀況[4].這種診斷的不明確甚至可以延誤治療。細胞塊技術(shù)通過離心包埋，集中獲得了最大限度濃縮的樣本，彌補了傳統(tǒng)涂片的不足之處，細胞塊石蠟包埋切片收集到的有核細胞多、細胞結(jié)構(gòu)清晰，與常規(guī)涂片法相結(jié)合，可以大大提高細胞學(xué)的陽性檢出率，對細胞量較少或診斷困難的標(biāo)本意義更大。而且細胞塊通過石蠟包埋后，可以進行特殊染色、免疫組化甚至分子病理學(xué)檢查。
本研究收集80例漿膜腔積液樣本，包括略渾濁的積液35例，血性或渾濁積液45例，對比試管包埋法、普通離心沉淀法、血清凝聚法和瓊脂凝聚法四種漿膜腔積液細胞塊制作方法在常見的積液中制備細胞塊的成功率以及細胞塊制備的完整性。研究結(jié)果顯示：在第一組略渾濁的積液中，試管包埋法與普通離心沉淀法、血清凝聚法，普通離心沉淀法與瓊脂凝聚法，普通離心沉淀法與血清凝聚法成功率的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=21.25、4.79、16.73、6.94,P均<0.01或P<0.05);而試管包埋法與瓊脂凝聚法，血清凝聚法與瓊脂凝聚法制作成功率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.40、2.52,P均>0.05).說明在略渾濁的積液中，成功率較高的是試管包埋法、瓊脂凝聚法以及血清凝聚法，而普通離心沉淀法雖然方法最為簡單，但成功率與前三者比較具有差異性。此外，對于略渾濁樣本，我們發(fā)現(xiàn)僅僅通過一次離心獲取細胞塊的成功率很低，有時需要多管離心，將沉淀物匯總后二次離心，這樣所需的細胞數(shù)量便會增多，有利于細胞塊的制備。但是，在實際工作中我們發(fā)現(xiàn)略渾濁積液往往屬于漏出液，由腫瘤引起的可能性非常低，因此盡管四種方法在制備澄清積液細胞塊的成功率不同，但是實際在診斷活動中需要制備成細胞塊的情況比較少，使用率比較低。
在血性或渾濁的積液中，四種方法制成細胞塊的成功率都在93.3%以上，比較沒有差異性(P>0.05).說明用任一種方法都能較為成功的制成細胞塊。由于血性或渾濁積液多為滲出液，由腫瘤或其他特殊感染等原因?qū)е碌目赡苄栽黾�，因此能夠采用四種方法成功制備出細胞塊有其實際意義。
此外，本研究還對四種方法制作成細胞塊的完整性進行了對比，比較哪一種細胞塊蠟塊制作形態(tài)更為完整。數(shù)據(jù)顯示，試管包埋法與普通離心沉淀法、血清凝聚法;普通離心沉淀法與血清凝聚法、瓊脂凝聚法;血清凝聚法與瓊脂凝聚法制作方法完整率的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2值=39.63、3.97、20.32、41.23、4.91,P均<0.01或P<0.05);而試管包埋法與瓊脂凝聚法制作完整率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.07,P>0.05).說明，在細胞塊制成完整性方面，試管包埋法與瓊脂凝聚法都能夠較為完整地保存細胞成分，且制成的細胞塊、切片形態(tài)較為完整，其效果優(yōu)于血清凝聚法、普通離心沉淀法。而普通離心沉淀法對于完整性的保存效果最差。細胞塊的完整性直接決定制作成的切片的完整性，如果結(jié)構(gòu)較為松散，不易于連續(xù)切片，切片容易掉片，尤其在需要高溫水煮的免疫組化指標(biāo)的制備過程中，掉片情況會更為顯著，易造成有效成分丟失和假陰性結(jié)果。
四種方法中，以普通離心沉淀法最為簡單，試管包埋法和血清凝聚法次之，瓊脂凝聚法操作步驟最為復(fù)雜。根據(jù)實驗結(jié)果，我們建議，在細胞成分不太多的略渾濁的漿膜腔積液樣本中，使用試管包埋法、瓊脂凝聚法，對于沉淀較少的樣本可以采取多管離心從而加大樣本量。而對于細胞成分豐富的血性或渾濁的漿膜腔積液樣本，四種方法都可采用，但試管包埋法由于其操作簡單、細胞塊形態(tài)完整性高，是較為理想的選擇，值得在基層醫(yī)院推廣。
參考文獻：
[1]郭智俊，彭桂香，潘乃梁。胸腹水沉淀物瓊脂石蠟雙包埋切片法與常規(guī)涂片法的對比[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2002,18(4):437-437.
[2]李琳，胡海，黃曉楠。胸腹水沉淀物制片方法介紹[J].診斷病理學(xué)雜志，2003,10(1):50-50.
[3]QueriozC,Barral-NettoM,BacchiCE.Characterizingscbpopulationsofneoplasticcellsinserouseffusions.Theroleofimmunocytochemistry[J].ActaCytol,2001,45(1):18-22.
[4]ImlaySP,RaabSS.Pleuralfluidcytology:immunocytochemistryusagepatternsandsignificanceofnondefinitivediagnoses[J].Diagncytopathol,2000,22(5):281-285.
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