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探討薄層掃描測定蛇床子素含量的優(yōu)點(diǎn)-職稱論文
畢業(yè)論文蛇床子為傘形科植物蛇床［Cnidium monnieri(L)Cuss.］的干燥成熟果實(shí)，具有溫腎壯陽、燥濕、祛風(fēng)殺蟲之功效［1］，中醫(yī)主要用來治療外陰濕疹、瘙癢、滴蟲性陰道炎、急性滲出性皮膚病等病癥。蛇床子主產(chǎn)于河北、山東、江蘇、浙江、4川等地，分布遍及全國各地，其主要有效成分為數(shù)種香豆素類化合物，其中蛇床子素是主要活性成分，含量最高，約占0.8%左右，約占總香豆素的60%［2］。蛇床子素（甲基歐芹酚Osthole, Ost）分子式為C15H16O3，化學(xué)名稱為7–甲氧基–8–異戊烯基香豆素，分子量244.29。蛇床子素有降壓作用［3］，心臟抑制作用［4］，促學(xué)習(xí)記憶作用［5］，性激素樣作用［6～8］，調(diào)節(jié)骨代謝 ［9, 10］，增強(qiáng)免疫力等作用［10］。蛇床子素具有很高的臨床應(yīng)用價(jià)值，本實(shí)驗(yàn)以薄層掃描法為測定其含量的方法優(yōu)選了提取工藝從而為其在臨床上的應(yīng)用做好了前期的工作。
1 材料與方法
1.1 藥品與儀器
1.1.1 藥品 中藥蛇床子，產(chǎn)地河北，購于張家口市華佗藥房；蛇床子素標(biāo)準(zhǔn)品購于南京青澤綠生植物有限公司；石油醚,乙醇,甲醇,乙酸乙酯均為分析純；CMC-Na硅膠G板（市售，10cm×5cm）。
1.1.2 儀器 WFH-203B型3用紫外分析儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司);KQ-250E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;KH-3000型薄層色譜掃描儀（上海科哲生化科技有限公司）;SP-Ⅱ型薄層電動(dòng)點(diǎn)樣器（上�？普苌萍加邢薰荆�;RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）。
1.2 方法
1.2.1 供試品的制備
回流提�。悍Q取50.0g蛇床子加８倍量95%乙醇（g/v），75℃下加熱回流360min，趁熱抽濾，得濾液Ⅰ。重復(fù)上1步得濾液Ⅱ、Ⅲ。合并3次濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中75℃恒溫蒸餾。蒸發(fā)至少量液體后，用95%乙醇定容至100mL。1mL溶液相當(dāng)于0.5g的蛇床子。作為供試品溶液1。
索氏提�。悍Q取50.0g蛇床子加８倍量95%乙醇（g/v），75℃下恒溫索氏提取600min，直至提取器中的乙醇液澄清，制備濾液。蒸餾，乙醇定容，使其每1mL溶液相當(dāng)于0.5g的蛇床子。作為供試品溶液2。
超聲波提�。悍Q取50.0g蛇床子加８倍量95%乙醇（g/v），75℃下超聲提取40min［11］ 制備濾液。蒸餾，乙醇定容后的濾液作為供試品溶液3。
1.2.2 對照品溶液的制備
陽性對照品溶液:精密稱取蛇床子素標(biāo)準(zhǔn)品10.2mg，用95%的乙醇溶解后定容至2mL，混勻,每1mL溶液相當(dāng)于5.1mg的蛇床子素標(biāo)準(zhǔn)品。
陰性對照品溶液:精密稱取大黃素標(biāo)準(zhǔn)品10.2mg，用95%的乙醇溶解后定容至2mL，混勻，每1mL溶液相當(dāng)于5.1mg的大黃素標(biāo)準(zhǔn)品。
1.2.3 薄層及掃描條件
蛇床子素標(biāo)準(zhǔn)品在薄層板上點(diǎn)樣后于200～400nm處進(jìn)行光譜掃描，在322nm處有1個(gè)較大吸收峰，在370nm處1個(gè)小吸收峰。為減少誤差采用雙波長反射法鋸齒掃描，λS=322nm,λR=370nm，SX=3。采用外標(biāo)兩點(diǎn)法定量。 以石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇=15∶2∶2為展開劑在CMC-Na硅膠G板上上行展開。1.2.4 點(diǎn)樣及展開 用薄層電動(dòng)點(diǎn)樣器按照“對照品2μL，供試品2μL，對照品4μL” 圖1 紫外燈下觀察結(jié)果 (1、3標(biāo)準(zhǔn)品溶液；2供試品溶液）順序點(diǎn)于同1硅膠G板上，上行展開25min，晾干后置于365nm紫外燈下觀察，用直尺對蛇床子素的熒光斑點(diǎn)定位。同法用大黃素（不含蛇床子素）做陰性對照。
2 結(jié)果
在本實(shí)驗(yàn)條件下，樣品中的蛇床子素與蛇床子素標(biāo)準(zhǔn)品的熒光斑點(diǎn)重心在同1直線上,斑點(diǎn)圓潤、清晰無拖尾現(xiàn)象,主斑點(diǎn)與其他斑點(diǎn)分離較好（見圖1）。蛇床子素標(biāo)準(zhǔn)品的Rf值為 0.49±0.04（n=9）。
3種提取方法得到的蛇床子中蛇床子素的含量結(jié)果見表1。表1 不同方法提取蛇床子中蛇床子素含量比較（略 ）
3 討論
蛇床子素用展開劑系統(tǒng)Ⅰ(石油醚∶乙酸乙酯=15∶2)［12］，在紫外燈下觀察發(fā)現(xiàn)樣品中的成分尚未分離開，依次考察了展開劑系統(tǒng)Ⅱ(石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇=15∶2∶1)，系統(tǒng)Ⅲ(石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇=14∶2∶1)，系統(tǒng)Ⅳ(石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇=15∶2∶2)。結(jié)果為系統(tǒng)Ⅳ展開蛇床子素結(jié)果最理想，無拖尾現(xiàn)象。
定量分析包括①洗脫測定法：試樣經(jīng)展開分離后，將該組分的斑點(diǎn)連吸附劑1齊刮下或取下，然后將該組分從吸附劑上洗脫下來，收集洗脫液，進(jìn)行定量測定，測定的方法1般采用分光光度法或比色法。②直接測定法：試樣經(jīng)色譜分離后，在薄板上對斑點(diǎn)進(jìn)行直接測定。薄層掃描法定量測定速度快，準(zhǔn)確度好，誤差范圍1般在±2%～±5%內(nèi)操作簡單，誤差小。
本實(shí)驗(yàn)粗略地比較了3種提取方法，結(jié)果表明同1溫度下超聲波提取法的提取率最高。從實(shí)際來看，此實(shí)驗(yàn)僅為實(shí)驗(yàn)室提取蛇床子素的初步工作，在此基礎(chǔ)上可優(yōu)選出更好的提取條件，為蛇床子素在藥理方面的研究做好前期工作。【參考文獻(xiàn)】
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