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香連素片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究論文
香連素片是廣東萬(wàn)年青制藥無限公司的產(chǎn)品，具有清熱燥濕、行氣止痛的成效，臨床用于干冷型痢疾、里急后重、腹痛泄瀉。本文是一篇香連素片質(zhì)量規(guī)范研討，讓我們一同來看看詳細(xì)內(nèi)容吧!
【摘要】 目的 樹立香連素片的質(zhì)量控制規(guī)范。辦法 采用薄層色譜法鑒別香連素片中的木香;采用高效液相色譜法測(cè)定香連素片中鹽酸小檗堿的含量。后果 在薄層色譜中檢出了木香;鹽酸小檗堿的進(jìn)樣量在0.0378～0.378 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 7)，均勻回收率爲(wèi)101.49%，RSD爲(wèi)1.97%(n=6)。結(jié)論 本辦法專屬性強(qiáng)、精確、重現(xiàn)性好，可作爲(wèi)香連素片的質(zhì)量控制規(guī)范。
【關(guān)鍵詞】 香連素片;木香;薄層色譜法;鹽酸小檗堿;高效液相色譜法
香連素片是廣東萬(wàn)年青制藥無限公司的產(chǎn)品，具有清熱燥濕、行氣止痛的成效，臨床用于干冷型痢疾、里急后重、腹痛泄瀉。其處方爲(wèi)木香500 g、鹽酸小檗堿75 g。原藥品規(guī)范[1]鑒別木香用試管反響，鹽酸小檗堿的含量用紫外分光光度法測(cè)定，辦法專屬性較低且影響要素多。本文采用薄層色譜法鑒別木香、高效液相色譜法測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，后果標(biāo)明操作簡(jiǎn)便、精確、反復(fù)性好，爲(wèi)該種類的質(zhì)量規(guī)范進(jìn)一步修訂提供了根據(jù)。
一、儀器與試藥
1.1 試藥
香連素片(批號(hào)：030801、030802、030803、040701、041002、050601、050802、060601、060602、060603)均爲(wèi)廣東萬(wàn)年青制藥無限公司產(chǎn)品;木香對(duì)照藥材(批號(hào)：921-9201)及鹽酸小檗堿對(duì)照品(批號(hào)：110713-200609)均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所;硅膠G預(yù)制板及硅膠G均由青島陸地化工廠消費(fèi);乙腈爲(wèi)色譜純;其他試劑與試藥均爲(wèi)剖析純。
1.2 儀器
LC?2010A高效液相色譜儀(日本島津), UV?2501PC紫外分光光度儀(日本島津), CQ?15A超聲波清洗器(上海躍進(jìn)醫(yī)用光學(xué)器材廠)。
二、薄層鑒別
取本品2片，研成細(xì)粉，加三氯甲烷10 mL，超聲(功率120 W，頻率50 Hz)處置30 min，濾過，濾液稀釋至2 mL，作爲(wèi)供試品溶液。另取木香對(duì)照藥材0.2 g、不含木香的陰性樣品，同法辨別制成對(duì)照藥材溶液及陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，汲取上述3種溶液各3 μL，辨別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉爲(wèi)?zhàn)ず蟿┑墓枘zG薄層板上，以三氯甲烷?環(huán)己烷(體積比5∶1)爲(wèi)展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)明晰。置可見光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的地位上，顯相反顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無攪擾，見圖1。
三、含量測(cè)定
3.1 色譜條件
色譜柱：phenomenex C18(150 mm×4.6 mm，5 μm) 活動(dòng)相：以磷酸鹽緩沖溶液[0.05 mol/L磷酸二氫鉀和0.01 mol/L十二烷基磺酸鈉(體積比1∶1)，含0.2%三乙胺]?乙腈(體積比60∶40)，用磷酸調(diào)理pH值至3.0爲(wèi)活動(dòng)相;流速：1.2 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：266 nm，柱溫：室溫，進(jìn)樣量：10 μL，實(shí)際塔板數(shù)不低于1500。
3.2 溶液的制備
3.2.1 對(duì)照品溶液的制備
取鹽酸小檗堿對(duì)照品過量，精細(xì)稱定，加乙醇制成每1 mL含120 μg的溶液，作爲(wèi)對(duì)照品溶液。
3.2.2 供試品溶液的制備
取本品20片，精細(xì)稱定，研細(xì)，精細(xì)稱取過量(約相當(dāng)于鹽酸小檗堿60 mg)，置索氏提取器中，加鹽酸?甲醇(體積比1∶100)過量，加熱回流提取至提取液無色，將提取液(必要時(shí)稀釋)移至50 mL量瓶中，用大批鹽酸?甲醇(1體積比∶100)的混合液洗濯容器，洗液并入提取液中，并濃縮至刻度，搖勻，精細(xì)量取1 mL，置10 mL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得。
3.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備
依照本品的處方、制法制備短少鹽酸小檗堿的模仿樣品，按“3.2.2”項(xiàng)辦法制成陰性對(duì)照溶液。
3.3 專屬性實(shí)驗(yàn)
辨別取供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液，按上述色譜條件測(cè)定，后果陰性對(duì)照對(duì)鹽酸小檗堿測(cè)定無攪擾，闡明辦法專屬性強(qiáng)。后果見圖2。
3.4 線性關(guān)系的調(diào)查
精細(xì)稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品過量，用乙醇溶解制成質(zhì)量濃度爲(wèi)37.8 μg/mL的溶液，辨別精細(xì)汲取1、2、4、6、8、10 μL注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定色譜峰面積，以進(jìn)樣量(m)爲(wèi)橫坐標(biāo)，色譜峰面積積分值(Y)爲(wèi)縱坐標(biāo)，繪制規(guī)范曲線，經(jīng)線性回歸，得線性回歸方程爲(wèi)Y=2.88725×106m-5586.84，r=0.999 7，標(biāo)明鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.0378～0.378 μg范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系。
3.5 波動(dòng)性實(shí)驗(yàn)
精細(xì)汲取同一批供試品溶液各10 μL，按上述色譜條件，每隔1 h測(cè)1次峰面積，后果標(biāo)明鹽酸小檗堿在24 h內(nèi)波動(dòng)，RSD爲(wèi)0.66%。
3.6 反復(fù)性實(shí)驗(yàn)
取同一批樣品共6份，辨別按“3.2.2”項(xiàng)下辦法停止制備溶液，并按上述色譜條件測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，后果RSD=0.90%,標(biāo)明辦法重現(xiàn)性良好。
3.7 回收率實(shí)驗(yàn)
精細(xì)稱取已知含量的樣品(批號(hào)：030802)共6份，辨別精細(xì)參加對(duì)照品過量，按“3.2.2”項(xiàng)下辦法制備溶液并按上述色譜條件測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，計(jì)算參加量的回收率。后果見表1。表1 鹽酸小檗堿加樣回收率實(shí)驗(yàn)(略)
3.8 精確度調(diào)查
以含量限制上限的50%爲(wèi)范圍低限、以含量限制下限的150%爲(wèi)范圍高限，調(diào)查測(cè)定范圍的精確度。
精細(xì)稱取已知含量的樣品(批號(hào)：030802)，按含量范圍高、低限折算取樣量，各6份，辨別精細(xì)參加對(duì)照品過量，按“3.2.2”項(xiàng)下辦法制備溶液并按上述色譜條件測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，計(jì)算參加量的回收率。后果見表2。表2 精確度實(shí)驗(yàn)后果(略)
3.9 樣品的測(cè)定
取10批樣品，辨別按“3.2.2”項(xiàng)下辦法制備溶液，辨別精細(xì)量取供試品溶液及對(duì)照品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，并按上述色譜條件，測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，后果見表3 。表3 樣品中鹽酸小檗堿的含量(略)
四、討 論
4.1 采用薄層色譜法鑒別木香時(shí),辨別采用自制板及預(yù)制板同時(shí)展開、預(yù)均衡與未均衡的條件展開，層析后果標(biāo)明：自制板與預(yù)制板的層析后果無差異，兩種展開條件均可檢出木香特征斑點(diǎn)，但以未均衡的條件展開，后果容易發(fā)生邊緣效應(yīng)，故展開時(shí)預(yù)均衡10 min較好。
4.2 薄層層析的環(huán)境影響
辨別在冰箱、室溫、絕對(duì)濕度45%和75%的環(huán)境條件下展開，后果標(biāo)明：在上述環(huán)境條件展開，均可檢出木香特征斑點(diǎn)，差別不大，故選用以室溫、絕對(duì)濕度45%～75%爲(wèi)展開環(huán)境條件，操作簡(jiǎn)便。
4.3 提取辦法的選擇
參照國(guó)度藥品規(guī)范[1]，供試品溶液的制備是經(jīng)索氏提取后上氧化鋁柱洗脫，操作較繁瑣。我們對(duì)提取辦法停止了優(yōu)化，只經(jīng)索氏提取后間接測(cè)定，并與原提取辦法的HPLC測(cè)定后果作比照。后果標(biāo)明：只經(jīng)索氏提取與原提取辦法的測(cè)定后果分歧，因而樣品的提取采用索氏提取法。
4.4 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇
取對(duì)照品溶液， 在200～500 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)停止掃描，在349、266、231 nm均有最大吸收，經(jīng)HPLC實(shí)驗(yàn)比擬，鹽酸小檗堿在266 nm波長(zhǎng)的峰面積值最大，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)爲(wèi)266 nm。
4.5 活動(dòng)相的選擇
參考文獻(xiàn)[3,4]，采用磷酸鹽緩沖溶液[0.05 mol/L磷酸二氫鉀和0.01 mol/L十二烷基磺酸鈉(1∶1)，含0.2%三乙胺]?乙腈(60∶40),辨別用磷酸調(diào)理pH值至3.0、3.2、3.5爲(wèi)活動(dòng)相，經(jīng)實(shí)驗(yàn)，當(dāng)活動(dòng)相的pH值爲(wèi)3.0時(shí)對(duì)照品及樣品的峰形對(duì)稱，反復(fù)性好，陰性對(duì)照無攪擾，故確定活動(dòng)相爲(wèi)磷酸鹽緩沖溶液[0.05 mol/L磷酸二氫鉀和0.01 mol/L十二烷基磺酸鈉(1∶1)，含0.2%三乙胺]?乙腈(60∶40)，用磷酸調(diào)理pH值至3.0。
4.6 耐用性調(diào)查
4.6.1 柱溫的調(diào)查
柱溫辨別爲(wèi)室溫、40 ℃時(shí)，色譜峰的別離度、峰形及峰面積根本分歧，故以室溫作爲(wèi)柱溫，操作較簡(jiǎn)便。
4.6.2 流速的調(diào)查
辨別設(shè)定流速爲(wèi)1.0、1.2及1.5 mL/min停止測(cè)定，后果標(biāo)明：當(dāng)流速爲(wèi)1.0 mL/min時(shí)保存工夫太長(zhǎng)，當(dāng)流速辨別爲(wèi)1.2及1.5mL/min時(shí)色譜峰的峰形及峰面積無甚差異，且前者的保存工夫短一些，故選擇流速爲(wèi)1.2 mL/min。
4.6.3 色譜柱的調(diào)查
選用3種不同廠牌的色譜柱：phenomenex C18 (150 mm×4.60 mm,5 μm)、DiamonsilTM C18 (250 mm×4.60 mm,5 μm)和 Spherisorb C18 (250 mm×4.60 mm,5 μm)，測(cè)定同一批樣品(批號(hào)：060602)的含量，后果3種色譜柱測(cè)得含量的RSD=0.61%(n=2)，標(biāo)明換用不同廠牌的色譜柱，均可失掉稱心的色譜圖，故本法的耐用性好。
【參考文獻(xiàn)】
[1]WS3—B—2572—97.國(guó)度藥品規(guī)范:衛(wèi)生部藥品規(guī)范第十三冊(cè)[S].1997:140.
[2]國(guó)度藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：2005年版一部[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：41.
[3]龐小雄，宋粉云，鐘兆健，等.HPLC法測(cè)定拈痛丸中鹽酸小檗堿的含量[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2007,23(3):240-242.
[4]張宇烽，馬安霓，陳小玲，等.HPLC法測(cè)定芩連葛根片鹽酸小檗堿的含量[J].廣東藥學(xué)，2004，14(7)：83.
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