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中藥預防流感的作用與黏膜免疫相關性探討
【摘要】目的探討中藥在預防流感中的作用和黏膜免疫的相關性。方法選用BALB/c小鼠120只，分成A、B兩組，A組分為六小組，每組10只，分別為是空白組(使用生理鹽水)、銀翹散制劑組、冰香散滴鼻組、玉屏風散制劑組、冰香散霧化組、利巴韋林組。連續(xù)給藥12d后處死小鼠，分離血清，收集每只小鼠的鼻咽沖洗液、腸道沖洗液以及支氣管肺泡灌洗液，然后使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測其免疫球蛋白A(IgA)的含量，空白組的小鼠稱體重和肺重，測定肺指數。B組同樣分為6組，每組10只小鼠，對應每組分別是病毒對照組、銀翹散制劑組、冰香散滴鼻組、玉屏風散制劑組、冰香散霧化組、利巴韋林組。給藥1周后對照組小鼠感染15LD50流感病毒，使用滴鼻感染的方式，感染后連續(xù)給藥5d，1次/d，感染5d后處死小鼠，同樣每只小鼠稱體重并測定肺指數，分離血清，收集每只小鼠的鼻咽沖洗液、腸道沖洗液以及支氣管肺泡灌洗液，然后使用ELISA檢測其IgA的含量。結果在對流感病毒所感染的小鼠產生的抑制作用方面，銀翹散制劑組、利巴韋林組與病毒組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);在對正常小鼠黏膜免疫產生的影響方面，銀翹散制劑組小鼠血清中IgA含量明顯較空白對照組高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);利巴韋林組小鼠支氣管-肺泡內sIgA較空白組下降明顯(P<0.05)。在對流感病毒感染小鼠黏膜免疫功能的影響方面，利巴韋林組小鼠血清中IgA含量明顯較對照對要高(P<0.05)。結論中藥預防流感和黏膜免疫具有相關性。
【關鍵詞】流感;黏膜免疫;免疫球蛋白A;中藥
流感是有流感病毒引起的一種呼吸道傳染病，病毒首先接觸呼吸道的黏膜，這樣黏膜就成了阻止病毒入侵的第一道防線，黏膜內的免疫細胞分泌的IgA能與病毒結合，阻止病毒入侵。中醫(yī)藥在預防流感上具有悠久的歷史，其給藥方式主要有口服、佩戴和煙熏等[1]。本研究旨在利用小鼠模型來探討重要預防流感的作用和黏膜免疫的一些相關性。
1、材料與方法
1.1實驗材料
1.1.1實驗動物6周大雌性BALB/c小鼠120只，SPF級，購于上海市實驗動物中心。
1.1.2實驗試劑和器材乙醚、小鼠ELISA試劑盒、利巴韋林;醫(yī)用的超聲霧化器、滅菌鍋、醫(yī)用的凈化工作臺、電子分析天平純水儀、酶標儀、低溫冰箱等。
1.1.3實驗所用藥物銀翹散制劑、冰香散、玉屏風散制劑、利巴韋林。
1.1.4實驗所用病毒株甲型流感病毒(H1N1)鼠肺的適應株是購于中國醫(yī)學科學院醫(yī)藥生物技術研究所，本研究所病毒室冷凍保存。
1.2實驗方法A組：60只小鼠隨機分成六組，每組10只，分別為空白組(使用生理鹽水)、銀翹散制劑組、冰香散滴鼻組、玉屏風散制劑組、冰香散霧化組、利巴韋林組。針對不同的預防方藥使用口服、滴鼻和霧化吸入的方式。給藥1次/d，共計12d。給藥的劑量分別為銀翹散制劑口服40g/kg，冰香散滴鼻組0.03g/kg，玉屏風散制劑組60g/kg，冰香散霧化組0.6g/kg，利巴韋林組口服100mg/kg。給藥12d后處死小鼠，收集血清、鼻咽沖洗液、支氣管肺泡沖洗液以及腸道沖洗液后ELISA檢測IgA的含量�？瞻捉M小鼠稱體重、肺重，測定肺指數。B組：給藥量與A組相同。對照組小鼠在乙醚麻醉后采用滴鼻感染的方式感染15LD50病毒液，每只小鼠約0.05ml，在給藥1周后攻擊感染，感染5d后處死，稱體重和肺重，測定肺指數。收集血清、鼻咽沖洗液、支氣管肺泡沖洗液以及腸道沖洗液后ELISA檢測IgA的含量。
1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數±標準差(x-±s)表示，采用t檢驗;計數資料以率(%)表示，采用χ2檢驗。顯著性檢驗取α=0.05。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。
2、結果
2.1不同中藥對流感病毒所感染的小鼠產生的抑制作用通過實驗，空白組小鼠的肺重為(0.15±0.02)mg，肺重指數(0.72±0.06)g/g，肺指數的抑制率0;病毒對照組小鼠的肺重為(0.23±0.04)mg，肺重指數(1.62±0.36)g/g，肺指數的抑制率0;銀翹散制劑組的肺重為(0.20±0.05)mg，肺重指數(1.04±0.43)g/g，肺指數的抑制率35.45%;利巴韋林組的肺重為(0.18±0.04)mg，肺重指數(1.09±0.41)g/g，肺指數的抑制率33.10%。統(tǒng)計可知，病毒對照組與空白組比較發(fā)現小鼠肺重明顯增加，肺指數明顯上升，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。銀翹散制劑、利巴韋林作用后小鼠肺指數的抑制率在25.48%～41.62%。銀翹散制劑組、利巴韋林組與病毒對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
2.2不同中藥對正常小鼠黏膜免疫產生的影響研究結果顯示，連續(xù)12d給藥后，空白組血清IgA為(1.81±0.35)g/L，鼻煙sIgA為(0.86±0.47)g/L，支氣管-肺泡sIgA為(13.12±2.48)g/L，腸道sIgA為(24.89±20.79)g/L;銀翹散制劑組血清IgA為(5.58±1.52)g/L，鼻煙sIgA為(0.91±0.85)g/L，支氣管-肺泡sIgA為(13.72±2.78)g/L，腸道sIgA為(38.59±28.48)g/L;利巴韋林組血清IgA為(2.31±1.15)g/L，鼻煙sIgA為(0.53±0.25)g/L，支氣管-肺泡sIgA為(7.45±1.69)g/L，腸道sIgA為(25.15±20.35)g/L。
銀翹散制劑組小鼠血清中IgA含量明顯較空白組要高，且差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，由此可知銀翹散制劑給藥方式都能提升小鼠的免疫力。利巴韋林組小鼠支氣管-肺泡內sIgA較空白組下降明顯，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
2.3不同預防中藥對流感病毒感染小鼠黏膜免疫功能的影響病毒對照組血清sIgA為(1.75±0.43)g/L，鼻煙sIgA(0.35±0.15)g/L，支氣管肺泡sIgA為(8.15±1.71)g/L，腸道sIgA為(90.25±47.10)g/L;銀翹散制劑組血清sIgA為(1.93±0.35)g/L，鼻煙sIgA(0.37±0.25)g/L，支氣管肺泡sIgA為(8.98±1.21)g/L，腸道sIgA為(89.89±32.10)g/L;利巴韋林組血清sIgA為(1.11±0.37)g/L，鼻煙sIgA(0.31±0.15)g/L，支氣管肺泡sIgA為(4.41±1.21)g/L，腸道sIgA為(72.35±23.89)g/L。結果顯示利巴韋林組小鼠血清中IgA含量明顯較病毒對照組要高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。利巴韋林則顯著降低了支氣管-肺泡內sIgA的分泌。
3、討論
病毒入侵時，機體的第一道屏障是黏膜，而黏膜免疫反應中其主要作用的就是IgA。流感病毒入侵機體往往是通過呼吸道黏膜，因此，呼吸道黏膜在抵抗流感的過程中起著舉足輕重的作用，呼吸道黏膜分泌的分泌型IgA-sIgA的多少決定了機體對流感的抵抗力大小[2]。
研究表明中藥對流感的預防有著很好的療效[3]。本研究結果表明銀翹散制劑、冰香散、玉屏風散、冰香散作用后小鼠的肺指數明顯改善，都能夠很好的預防流感，并在一定程度上減輕感染鼠肺后的病變程度。利巴韋林給藥能夠抑制黏膜分泌IgA，不宜作為流感預防用藥。口服、佩戴和煙熏三種中藥給藥的方式都可以作用于消化道和呼吸道黏膜，使黏膜分泌IgA。因此，中藥預防流感的作用和黏膜免疫具有一定的相關性。
參考文獻：
[1]孫翠娥，楊篤然，丁正琪，等.中草藥煙熏對空氣消毒及預防呼吸道傳染病作用的研究.現代生物醫(yī)學進展，2007，7(12)：1884-1885.
[2]徐培平，丁偉，趙昉，等.中藥預防流感作用與黏膜免疫相關性研究.中國免疫學雜志，2012，28(11)：992-998.
[3]蘇惠萍，沈薔，武維屏，等.中醫(yī)預防方案干預社區(qū)流感的隨機對照研究.北京中醫(yī)藥大學學報，2010，33(10)：690-694.
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