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廣東標(biāo)準(zhǔn)與中國(guó)藥典陳皮炮制品中橙皮苷含量的比較
【摘要】 目的 以橙皮苷為指標(biāo)比較廣東標(biāo)準(zhǔn)陳皮炮制品與藥典標(biāo)準(zhǔn)炮制的陳皮的質(zhì)量差異。方法 高效液相色譜法，色譜條件：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)為色譜柱，流動(dòng)相為甲醇?水(體積比40∶60)，流速為1.0 mL/min，柱溫為25 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為284.1 nm，進(jìn)樣量為10 μL。結(jié)果 廣東標(biāo)準(zhǔn)陳皮炮制品中的橙皮苷含量平均值為4.276%，藥典標(biāo)準(zhǔn)炮制陳皮的橙皮苷含量平均值為4.257%，兩種方法差異無(wú)顯著性意義。結(jié)論 廣東標(biāo)準(zhǔn)陳皮炮制品的質(zhì)量與藥典標(biāo)準(zhǔn)炮制品水平持平。
【關(guān)鍵詞】 陳皮;橙皮苷;廣東標(biāo)準(zhǔn);國(guó)家標(biāo)準(zhǔn);高效液相色譜法
Abstract:Objective To compare the quality of Citrus reticulata Blanco processed according to Guangdong standard and Chinese Pharmacopeia based on the content of hesperidin.Method Hesperidin in Citrus reticulata Blanco processed from the two standards was analyzed on a Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)column using methanol?water(40∶60) as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL/min and detection wavelength 284 nm. Result The average content of hesperidin in Citrus reticulata Blanco processed by Guangdong standard was 4.276%, and that by Chinese Pharmacopeia was 4.257%, while no significant difference was noted in respect of the content between the two processings. Conclusion Similar qualities of Citrus reticulata Blanco are obtained from the two processings.
Key words:Citrus reticulata Blanco; hesperidin; HPLC
陳皮為蕓香科植物橘(Citrus reticulata Blanco)及其栽培變種的干燥成熟果皮，味苦、辛，性溫，可理氣健脾、燥濕化痰，用于胸脘脹滿、食少吐瀉、咳嗽痰多[1]。主產(chǎn)于廣東、福建、四川、江蘇、浙江、江西、湖南等地[2]。橙皮苷是陳皮中含量較高的一種雙氫黃酮氧苷物質(zhì)，早期作為維生素P，具有增強(qiáng)毛細(xì)血管壁作用，現(xiàn)代研究表明其具有降低血壓、抗過(guò)敏、降低低密度膽固醇、影響血壓、改變體內(nèi)酶活性、改善微循環(huán)、抗菌、抗肝炎、抗氧化、抗腫瘤、抗癌等生理功能，具有很高的藥用價(jià)值[3]。
陳皮有多種炮制方法，不同的藥品標(biāo)準(zhǔn)收載的方法也不相同，《中國(guó)藥典》2005版規(guī)定陳皮的炮制方法為除去雜質(zhì)，噴淋水，潤(rùn)透，切絲，陰干[1]�！稄V東省中藥炮制規(guī)范》1984版中陳皮炮制方法與藥典方法不同，主要用蒸制。為了比較廣東地方標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)陳皮的質(zhì)量差異，探討飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本文采用高效液相色譜法對(duì)10個(gè)樣品的陳皮中橙皮苷進(jìn)行含量測(cè)定，為廣東地區(qū)飲片生產(chǎn)的規(guī)范化和陳皮炮制工藝的合理性提供理論依據(jù)。
1、儀器與試藥
Waters高效液相色譜儀(四元泵，二極管陣列檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣)，DK?S26型電熱恒溫水浴鍋(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，RE?52?98旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)，SHZ?D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏義市英峪予華儀器廠)。
橙皮苷對(duì)照品(批號(hào)721-9202，中國(guó)藥品生物制品檢定所)，石油醚(60～90℃)為分析純，甲醇有化學(xué)純和色譜純，水為二級(jí)水。10個(gè)陳皮藥材樣品的購(gòu)入地見(jiàn)表2。
2、方法與結(jié)果
2.1色譜條件
色譜柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相：甲醇?水(體積比40∶60);流速：1.0 mL/min;柱溫：25 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：284.1 nm;進(jìn)樣量：10 μL。色譜圖見(jiàn)圖1。
2.2對(duì)照品溶液的制備
精密稱取橙皮苷對(duì)照品0.00373 g，以甲醇溶解并定容至5 mL，搖勻，過(guò)微孔濾膜，即得對(duì)照品溶液(0.746 mg/mL)。
2.3供試品溶液的制備
將各陳皮樣品粉碎，置50 ℃烘干30 min，取出置干燥器內(nèi)備用。
精密稱取各樣品1 g，加甲醇100 mL，回流提取2次，每次2 h，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮，甲醇定容至100 mL，搖勻，過(guò)微孔濾膜，即得供試品溶液。
2.4檢測(cè)波長(zhǎng)的確定
紫外掃描樣品溶液顯示其最大吸收在284.1 nm處，因此以此波長(zhǎng)為檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行含量測(cè)定。
2.5線性關(guān)系考察
按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別吸取對(duì)照品溶液2、4、5、6、8、10 μL進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(m)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算得回歸方程為A=2 267 200m-396 288，r=0.999 7，線性范圍是1.492～7.460 μg。
圖1HPLC色譜圖 略
2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)
在同樣的色譜條件下，將同一供試品溶液在0、2、4、8、12、24 h各進(jìn)樣1次測(cè)定，測(cè)得峰面積的RSD=1.99%，說(shuō)明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.7精密度試驗(yàn)
將同一供試品溶液按“2.1”項(xiàng)下條件重復(fù)進(jìn)樣6次，分別測(cè)定峰面積，結(jié)果得RSD=2.02%。
2.8重復(fù)性試驗(yàn)
精密稱取同種樣品5份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備，并按“2.1”項(xiàng)下色譜條件平行測(cè)定5次，計(jì)算含量，結(jié)果得RSD=3.05%。
2.9加樣回收試驗(yàn)
采用加樣回收法，精密稱取已知橙皮苷含量的樣品5適量，分別精密加入一定量的橙皮苷對(duì)照品，按“2.3”項(xiàng)方法制備，并按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測(cè)定，平行做5份，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1橙皮苷回收率試驗(yàn)結(jié)果 略
2.10樣品含量測(cè)定
將10份供試品溶液分別按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算橙皮苷在藥材中的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。將廣東本省炮制的藥材與藥典法炮制的藥材進(jìn)行橙皮苷含量的比較，結(jié)果見(jiàn)表3，從表3結(jié)果可看出，兩種方法結(jié)果比較差異無(wú)顯著性(P>0.05)。
表210種陳皮樣品中橙皮苷的含量 略
表3兩種炮制方法橙皮苷含量的比較 略
3、討 論
3.1本實(shí)驗(yàn)考察了藥典提取方法，即用石油醚索氏提取3 h脫脂后再用甲醇提取，高效液相譜圖顯示在橙皮苷的峰附近沒(méi)有雜峰干擾;再改用甲醇直接提取，高效液相的譜圖變化不大，橙皮苷的峰附近也沒(méi)有雜峰干擾，并且該峰面積增加。因此最后確定用甲醇直接提取。
3.2根據(jù)文獻(xiàn)[3-5]記載，流動(dòng)相大多數(shù)采用甲醇?水洗脫系統(tǒng)。在實(shí)驗(yàn)中，首先用甲醇?水(體積比45∶55)洗脫，橙皮苷約10 min出峰，但與前一個(gè)峰分離不好;更換為甲醇?水(體積比35∶65)洗脫，峰的分離很好，但是橙皮苷在約45 min出峰，時(shí)間太長(zhǎng)，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度;調(diào)整為甲醇?水(體積比40∶60)，峰分離度好，出峰時(shí)間約20 min，時(shí)間合適，故流動(dòng)相確定為甲醇?水(體積比40∶60)。
3.3HPLC法測(cè)定中，按《中國(guó)藥典》2005版標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)的陳皮中橙皮苷的含量以秦皇島唐人醫(yī)藥店的樣品含量最高，秦皇島艾欣超市的樣品最低。廣東的5個(gè)樣品雖然按地方標(biāo)準(zhǔn)炮制規(guī)范生產(chǎn)，但與其他樣品在含量上并未有較大區(qū)別;而在5個(gè)樣品之間卻有差異，最高為5.500%，最低為3.473%，由此反映出飲片內(nèi)在質(zhì)量的不同�！吨袊�(guó)藥典》2005版對(duì)陳皮中橙皮苷的含量做出不得少于3.5%的規(guī)定，本次10個(gè)樣品中，除了2個(gè)樣品橙皮苷的含量略低之外，其他樣品都符合要求。
4、結(jié) 論
廣東標(biāo)準(zhǔn)陳皮炮制品與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)陳皮炮制品的橙皮苷含量沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，故就整體而言，廣東標(biāo)準(zhǔn)陳皮炮制品的質(zhì)量符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。
【參考文獻(xiàn)】
[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005:136.
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[3] 李紅，趙征，汪滿情.橙皮苷提取工藝條件的研究[J].食品研究與開(kāi)發(fā),2003,24(2):29-31.
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[5] 運(yùn)委，張建蘋(píng).高效液相色譜法測(cè)定蛇膽陳皮散中橙皮苷的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006(5)：60-61.
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