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高效液相色譜法測定亞胺培南-西司他丁鈉的含量
【摘要】亞胺培南-西司他丁鈉為新型β-內(nèi)酰胺類抗生素，既有極強的廠譜抗菌活性，又有β-內(nèi)酰胺酶抑制作用。采用高效液相法色譜測定亞胺培南-西司他丁鈉，方法可靠、簡便、準確。
【關鍵詞】西司他丁鈉; 高效液相色譜法
儀器與試藥
島津LC2010A型高效液相色譜儀，Waters millipore真空泵，SB5200型超聲波儀，F(xiàn)13型酸度計，島津MultiSpec1501紫外分光光度計。CS原料3批;CS對照品(純度97.8%)由我市藥品檢驗所提供;乙腈為色譜純，磷酸銨、磷酸二氫鉀、鹽酸、30%過氧化氫、氫氧化鈉均為分析純。
2方法與結果
2.1色譜柱：Diamond C18(4.6mm×250mm，5μm);流動相：乙腈∶0.1mol/L磷酸銨(精密稱取磷酸銨20.31mg，加1000ml水使溶解并稀釋至刻度，用磷酸調至pH6.8)(30∶70);流速0.8ml/min;檢測波長210nm;柱溫50℃;進樣量20μl。柱效與不對稱度取CS對照品溶液進樣，理論塔板數(shù)按CS峰計算為7070。進樣精密度試驗取CS對照品溶液連續(xù)進樣5針，其峰面積的RSD為0.008%，表明系統(tǒng)精密度良好。對CS對照品進行高溫、氧化、強酸、強堿的破壞性試驗，以研究其降解產(chǎn)物與主峰的分離情況。在選定的色譜條件下，取上述破壞后供試品溶液進樣，結果主峰與各雜質峰獲得有效分離，提示氧化和強酸破壞產(chǎn)生較大雜質，高溫和強堿破壞總雜質量和雜質個數(shù)變化不大，表明CS在氧化、強酸條件下較不大穩(wěn)定，強堿和高溫對樣品影響較小。精密稱取CS對照品及已知含量的樣品各三份，分別置于100ml量瓶中加水溶解并稀釋至刻度。
2.2制成含量測定：濃度的80%、100%和120%的溶液，搖勻，濾過，進樣，結果低、中、高3個濃度的回收率分別為100.1%(RSD=0?28%)、100.8%(RSD=1.24%)和99.8%(RSD=0.53%);平均回收率為100.2%(n=9)，表明方法準確度良好。精密稱定CS對照品，置25ml容量瓶中，加水使溶解，加至刻度，分別制成0.0793、0.1586、0.3172、0?4758和0.6344mg/ml對照品溶液按“2.1”項色譜條件進行測定，以對照品溶液濃度為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標。同一批樣品，分別進樣6次，依法測定含量，結果含量的RSD為0.08%，表明方法精密度良好。
以信噪比≈3時，注入儀器的量確定CS的檢測限為1.8ng;以信噪比≈10時，確定CS的定量限為5.9ng。在同一批樣品的溶液，在0、1、2、3、4和5h分別進樣進行考察溶液的穩(wěn)定性，測得峰面積的積分值，結果RSD為0?78%，表明在室溫(25℃)條件下，溶液放置6h，其主峰面積沒有變化，保留時間也基本沒有變化。因此，CS溶液穩(wěn)定性好。
3討論
亞胺培南-西司他丁鈉為新型β-內(nèi)酰胺類抗生素，既有極強的廠譜抗菌活性，又有β-內(nèi)酰胺酶抑制作用。本品具有第一代頭孢菌素強大的抗革蘭陽性菌的作用特點，又具有第三代頭孢菌素對陰性桿菌產(chǎn)生的廣譜β-內(nèi)酰胺酶的高度穩(wěn)定性，對陰性桿菌，包括耐藥陰性桿菌有極強的抗菌活性，極易對β-內(nèi)酰胺類抗生素產(chǎn)生耐藥性的綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、糞鏈球菌、脆弱擬桿菌等，對本品也高度敏感。本品的抗菌譜幾乎包括了臨床上所有的有意義的致病菌部分耐甲氧西林金葡菌，D族鏈球菌對亞胺培南晃敏感。西司池于無抗菌作用，但在體內(nèi)可抑制腎細胞分泌的脫氫肽酶，使亞胺培南免受水解破壞。用于各類敏感菌所致的感染。
西司他丁鈉是一種很好的腎去氫肽酶I抑制劑，其本身不具有抗菌活性，對β?內(nèi)酰胺酶也無抑制作用，它是碳青霉烯類藥物亞胺培南的增效劑。IMP單獨給藥時，經(jīng)腎小球過濾或分泌后，被近端腎小管上皮細胞刷狀緣中的去氫肽酶I水解失活60%-95%，導致尿中活性藥物濃度降低。CS能阻抑IMP進入腎小管上皮組織，減少IMP的排泄并保護IMP在腎中不被破壞，可防止因IMP引起的腎小管壞死，減輕藥物的腎毒性，增加療效。兩者合用后西司他丁減少IMP被腎小管上皮細胞的去氫肽酶水解，可使IMP的AUC增加20%，在尿中回收的原形藥物多達70%，所以在制劑時IMP/CS以等量配制[1]。
本文選用季胺類離子對試劑磷酸銨。磷酸銨與CS為同種電荷，在本色譜系統(tǒng)中，一方面與溶劑間存在靜電排斥力，另一方面作用于固定相表面，抑制溶劑的親硅醇基團效應，達到改善對稱性，提高柱效，縮短溶質保留時間。在本試驗中曾用0.1mol/L的磷酸溶液，但是同樣濃度下改善峰形的效果遠不如磷酸銨。在流動相中加入較低濃度的磷酸調節(jié)pH至6?8，有助于保持峰形的對稱性。在流動相的pH選擇上，曾用pH5.5、pH6?0、H6.5以及pH6.8但都不及pH6.8，在此條件下，主峰保留時間縮短，柱效明顯增加。有機相選用30%的乙腈與磷酸銨混合，是用來加快CS的出峰時間，降低柱壓，提高柱效，改善主峰與雜質峰的分離度。電位滴定法測定CS含量時，共有三個突躍點，計算采用第一和第三突躍之間的滴定數(shù)差值。但是它的第一個突躍很不顯著，影響結果的判定，也影響測定準確度。采用高效液相色譜法，簡單、快速且準確度高。
參考文獻
[1]張建民，馮玲玲，李勇，等. 抗菌藥物增效劑[J]. 中國藥師，2003，6(3)：172-173
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