論烏龍丹對大鼠局灶性腦缺血腦組織氧自由基的影響

　　論文關鍵詞：烏龍丹；氧自由基；大鼠局灶性腦缺血模型
　　論文摘要：目的：觀察烏龍丹對大鼠局灶性腦缺血腦組織中氧自由基的影響。方法：復制大鼠局灶性腦缺血病理模型，于缺血后24h，取腦組織測定SOD活性及MDA含量。結果：缺血24h后，腦組織SOD活性明顯降低而MDA含量明顯升高(P＜0.05)；烏龍丹可使腦組織中SOD活性提高，同時使MDA含量降低(P＜0.05)。結論：烏龍丹抗缺血性腦損傷的作用機理可能與其減輕氧自由基毒性反應有關。
　　
　　缺血性腦病是常見病、多發(fā)病，現(xiàn)代表明，氧自由基的毒性作用是引發(fā)腦缺血后神經(jīng)細胞損害病理級聯(lián)反應的重要環(huán)節(jié)，本實驗通過檢測烏龍丹對大鼠局灶性腦缺血模型中腦組織氧自由基的變化情況，以探討治療缺血性腦病臨床經(jīng)驗方烏龍丹是否可通過影響缺血腦組織中氧自由基的含量，從而起到神經(jīng)元保護作用。
　　
　　1　實驗
　　烏龍丹物，由南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院房提供，加工為流浸膏(2.5g/mL)；MDA、SOD試劑盒(南京建成生物制品研究所)，蛋白定量試劑盒(伊利康生物工程研究所)，分析純冰乙酸，20％磷鎢酸溶液，0.8％硫代巴比妥酸(TBA)溶液(南方醫(yī)科大學試劑中心)；754型紫外分光光度計(上海第三分析儀器廠)，高速低溫離心機(美國貝克曼公司)。
　　
　　2　實驗分組
　　Wistar大鼠36只，清潔級，雌雄各半，體重(250±20)g，批號2004A068，由南方醫(yī)科大學動物中心提供。隨機分成正常組、假手術組、模型組，烏龍丹低劑量組、中劑量組、高劑量組。給藥組術前灌服烏龍丹流浸膏，給藥7天，低、中、高給量分別為1、2、4mL，正常組、假手術組和模型組灌服2mL生理鹽水。于末次給藥后2h造模，術后連續(xù)給藥，24h后處死。
　　
　　3　實驗方法
　　3．1　模型制備　假手術組只做開顱術，不結扎血管；模型組與實驗組開顱制作大鼠局灶性腦缺血模型，操作過程如下：結扎右側頸總動脈，夾閉左側頸總動脈，阻斷右側大腦中動脈。
　　3．2　樣品制備　造模后24h立即處死動物，準確稱取右側大腦，在冰浴上分離出缺血區(qū)腦組織，以冰鹽水沖洗后除去殘血，吸干后稱重，按1:9(W:V)比例加入冰生理鹽水，制成10％腦勻漿液，離心1000×g，10min(4℃)，取上清液檢測。
　　3．3　指標檢測　蛋白含量測定用Lowery法，SOD檢測用黃嘌呤氧化酶法，MDA檢測用TBA顯色法，均按試劑盒說明完成。
　　3．4　學處理　采用SPSS10.0統(tǒng)計分析軟件處理。各項指標的實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x±s)表示，多組間計量資料采用單因素方差分析，P＜0.05定義為有統(tǒng)計學意義。
　　
　　4　結　果
　　缺血24h后，與正常組對比，模型組腦組織中SOD活性減低、MDA含量升高(P＜0.05)；與模型組對比，烏龍丹3個劑量組均可提高SOD活性并降低腦組織MDA含量(P＜0.05)。
　　
　　5　討　論
　　腦缺血后，由于能量缺乏：鈣泵功能失調(diào)，細胞膜去極化，大量的興奮性氨基酸釋放，激活鈣通道，導致細胞外Ca²⁺內(nèi)流，過量的Ca²⁺激活胞內(nèi)依賴于Ca²⁺蛋白水解酶．黃嘌呤還原酶迅速轉變?yōu)辄S嘌呤氧化酶，同時缺血條件下ATP產(chǎn)生大量游離腺苷，降解為次黃嘌呤，次黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶催化下轉化為黃嘌呤，在轉化過程中生成超氧陰離子等多種自由基，大量形成的氧自由基攻擊蛋白、脫氧核酸和脂質膜，破壞細胞的功能和結構完整性，因而導致細胞的損害，實驗表明應用自由基清除劑可有效減輕缺血性腦細胞損傷。
　　烏龍丹是名老臧堃堂教授經(jīng)驗方，全方由生黃芪、葛根、制首烏、川芎、丹參、地龍、全蝎、制僵蠶、水蛭、生曬參、石菖蒲、女貞子、白術、當歸等14味組成，諸藥合用具有益氣話血、補腎填髓、化瘀通絡的功效。本方治則以益氣活血為主，是以補陽還五湯為基礎化裁擬制，已有實驗證明補陽還五湯具有抗自由基毒性作用。本研究結果顯示：(1)缺血24h腦組織SOD活性降低、MDA含量升高；證實在大鼠局灶性腦缺血模型神經(jīng)元損傷病理過程中存在自由基毒性病理反應。(2)烏龍丹可提高缺血后腦組織中SOD活性并降低MDA含量，而SOD及MDA是反映自由基損傷的指標，SOD能清除自由基而具有抗自由基損傷作用，NDA為脂質過氧化物的代謝產(chǎn)物，其含量的多少在一定程度上反映組織細胞損傷的程度，因而這一實驗結果表明烏龍丹減弱了自由基的毒性反應，起到了抗氧化作用，從而產(chǎn)生了對缺血后神經(jīng)細胞的保護作用。其作用機制可能是烏龍丹在自由基的生成過程某些環(huán)節(jié)中起到良性的調(diào)節(jié)作用，或增強了機體清除自由基能力，減輕自由基毒性反應所引起神經(jīng)細胞損害，具體機制有待進一步研究探討。

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