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淺析不同針刺量對(duì)大鼠腦缺血后突觸可塑性的影響
摘要： 【目的】觀察不同針刺量對(duì)腦缺血后海馬齒狀回（DG）突觸可塑性的影響�！痉椒ā窟x用Wistar 大鼠36只，隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血模型組、治療1組（每日針刺1次）、治療2組（每日針刺2次），采用熱凝閉大鼠大腦中動(dòng)脈法復(fù)制局灶性腦缺血模型，治療1、2組給予電針百會(huì)、大椎穴治療。觀察不同針刺次數(shù)對(duì)腦缺血后DG區(qū)突觸可塑性的影響�！窘Y(jié)果】與假手術(shù)組比較缺血模型組興奮性突觸后電位（EPSP）、群峰電位（PS）的輸入/輸出曲線（I/O曲線）幅度顯著降低（P＜0?05）；與缺血模型組比較治療1組EPSP、 PS的I/O曲線顯著升高（P ＜0?01或P＜0?05）, 與假手術(shù)組比較無顯著性差異（P＞0?05）。與缺血模型組比較治療2組EPSP、 PS的I/O曲線顯著升高（P＜0?05），與假手術(shù)組比較EPSP的I/O曲線幅度降低（P＜0?05），而PS的幅度無顯著性差異（P＞0?05）；與治療1組比較治療2組EPSP的I/O曲線幅度降低（P＜0?05），PS的幅度無顯著性差異（P＞0?05）。EPSP的長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)（LTP）幅度缺血模型組較假手術(shù)組顯著升高（P＜0?05），兩個(gè)治療組較假手術(shù)組顯著升高（P＜0?05），與缺血模型組比較及組間比較均無顯著性差異（P＞0?05）。PS的LTP幅度缺血模型組較假手術(shù)組顯著降低 （P＜0?05），兩個(gè)治療組顯著高于缺血模型組（P＜0?05），與假手術(shù)組比較及組間比較均無顯著性差異（P＞0?05）。EPSP的長(zhǎng)時(shí)程抑制（LTD）幅度缺血模型組較假手術(shù)組降低 （P＜0?05），兩個(gè)治療組EPSP的LTD幅度較假手術(shù)組顯著降低 （P＜0?05），與缺血模型組比較及組間比較均無顯著性差異（P＞0?05）。缺血模型組PS的LTD幅度與假手術(shù)組比較無顯著性差異（P＞0?05），治療1組PS的LTD幅度與假手術(shù)組比較顯著升高（P＜0?05），與缺血模型組比較無顯著性差異（P＞0?05）；治療2組與其他3組比較均無顯著性差異（P＞0?05）�！窘Y(jié)論】針刺對(duì)缺血引起的海馬DG區(qū)EPSP、PS的I/O曲線幅度變化起保護(hù)作用，能修復(fù)缺血造成的海馬DG區(qū)PS的LTP誘導(dǎo)的損害，而不同針刺量對(duì)改變腦缺血后海馬的LTP誘導(dǎo)方面的作用無顯著性差異。關(guān)鍵詞： 腦缺血/針灸療法；突觸可塑性；疾病模型，動(dòng)物；大鼠；穴，百會(huì)；穴，大椎
突觸是神經(jīng)元之間信息傳遞和加工的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)，在腦和脊髓中，整個(gè)神經(jīng)元表面積（包括胞體、樹突和軸突）有60%～80%的部位被突觸所占據(jù)。突觸可塑性一般即指突觸傳遞的可塑性，突觸可塑性是腦可塑性的主要表現(xiàn)，皮層聯(lián)絡(luò)纖維的突觸可塑性是皮層圖重建的基礎(chǔ)［1-3］。前期研究表明［4］針刺能阻止由永久性的大腦中動(dòng)脈閉塞缺血造成的缺血同側(cè)海馬DG區(qū)基本的突觸傳遞降低和單脈沖刺激海馬穿通纖維引起的齒狀回顆粒細(xì)胞的共同發(fā)放幅度的降低，消除缺血對(duì)海馬DG區(qū)突觸傳遞造成的損害；能明顯改善由永久性大腦中動(dòng)脈閉塞造成的海馬突觸傳導(dǎo)效率的損害。針刺是治療腦缺血疾病的有效方法之一，但對(duì)針刺治療腦缺血的時(shí)機(jī)選擇、治療間隔時(shí)間、留針時(shí)間、療程等尚存在爭(zhēng)議［5］。本研究觀察了不同針刺次數(shù)對(duì)腦缺血海馬突觸傳遞效率的影響，以探討針刺治療腦缺血的最佳參數(shù)�，F(xiàn)報(bào)道如下。
1材料和方法
1?1動(dòng)物健康雄性Wistar大鼠36只（由中國(guó)科技大學(xué)生命科學(xué)院動(dòng)物房提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物機(jī)構(gòu)許可證號(hào)：D010203），體質(zhì)量210～290g，鼠齡8～10周。用普通顆粒型大鼠飼料（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為蛋白23%，脂肪4?7%，鈉鹽0?24%）喂養(yǎng)，飲用自來水。室溫18℃～26℃，濕度60%～80%，光暗周期12h。由抽簽法隨機(jī)分為假手術(shù)組﹑缺血模型組、治療1組和治療2組，每組9只。
1?2主要儀器電熱灼器（932型，上海醫(yī)療器械八廠）；30號(hào)1寸毫針（華佗牌，蘇州醫(yī)療用品廠）；電針儀（805?A Ⅱ 型，廣東汕頭市醫(yī)用設(shè)備廠）；立體定位儀（江灣 Ⅰ 型，上海第二軍醫(yī)大學(xué)）。
1?3模型復(fù)制采用熱凝閉大腦中動(dòng)脈法復(fù)制局灶性腦缺血模型［6］。以100mg/L水合氯醛溶液，按400mg/kg腹腔注射麻醉，然后取右上側(cè)臥位固定，沿耳—眼連續(xù)中點(diǎn)切開皮膚，分離顳肌，暴露顳骨作一骨窗，輕抬腦，顯露大腦中動(dòng)脈，用燒紅的電熱灼器輕觸大腦中動(dòng)脈，使之凝閉，復(fù)制局灶性腦缺血模型。其中假手術(shù)組手術(shù)時(shí)只暴露大鼠大腦中動(dòng)脈，不予凝閉。治療組立即給予電針治療。
1?4治療方法
1?4?1穴位選擇穴位選取督脈經(jīng)穴“百會(huì)”、“大椎”，其定位參照大鼠的常用針灸穴位［7］：“百會(huì)”穴位于頂骨正中；“大椎”穴在第7頸椎與第1胸椎間，背部正中。
1?4?2刺法治療1組大鼠以30號(hào)1寸毫針斜刺入百會(huì)0?5寸，直刺入大椎0?5寸，將針柄分別連接至電針儀上，5~10Hz，疏密波，強(qiáng)度以大鼠安靜耐受為度，一般3~5V，時(shí)間30min，每天1次，均在上午10點(diǎn)左右進(jìn)行，治療2組于每天下午3時(shí)左右再治療1次，參數(shù)同前，均連續(xù)治療2周。而假手術(shù)組和缺血模型組大鼠只在同等條件下飼養(yǎng)，未予任何處理。
1?5神經(jīng)功能缺損評(píng)分（sNS)待大鼠蘇醒后（術(shù)后3h)及2周后分別觀察大鼠行為表現(xiàn)并進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分。方法：溫和地提起動(dòng)物尾巴，懸于地面上方1m高處；置于地面，輕輕側(cè)推其肩胛部，參照Bederson等［8］的評(píng)分方法行神經(jīng)檢查等級(jí)評(píng)分，評(píng)估大腦中動(dòng)脈阻斷后大鼠的神經(jīng)損傷狀況，3h時(shí)段缺血模型組與治療組評(píng)分1分以下者剔除，不作為觀察對(duì)象。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0分為向地面伸展兩前肢，未見行為異常；1分為腦損傷對(duì)側(cè)前肢持續(xù)地屈曲；2分為腦損傷對(duì)側(cè)前肢屈曲，腦損傷對(duì)側(cè)肩內(nèi)收但無扭轉(zhuǎn)，側(cè)推抵抗力弱；3分為腦損傷對(duì)側(cè)前肢屈曲，腦損傷對(duì)側(cè)肩內(nèi)收有扭轉(zhuǎn)，側(cè)推無抵抗力。
1?6麻醉、固定和手術(shù)造模14d后，大鼠以100g/L烏拉坦溶液（1?8g/kg腹腔注射)麻醉，藥量不夠可酌情補(bǔ)加10%。將麻醉后的大鼠固定在立體定位儀上，固定耳桿和上門齒，調(diào)整動(dòng)物向上傾約18°~22°，此角度每次實(shí)驗(yàn)都需要重新測(cè)定，以確保電極是垂直插入。在缺血同側(cè)用剪刀小心剪開皮膚，暴露頭骨，在電極要插入部分標(biāo)記并打孔，孔徑2?5mm×2?5mm，分別去除碎骨片、硬腦膜和軟腦膜，暴露皮層，并滴入生理鹽水和石蠟油（以使皮層在實(shí)驗(yàn)過程中保持濕潤(rùn)）。體溫維持儀測(cè)定動(dòng)物體溫，在實(shí)驗(yàn)過程中維持體溫在（37±1）℃，心電經(jīng)前放大器放大后，在示波器上顯示。
1?7刺激和記錄刺激電極為雙極電極，用兩根彼此接近但又相互絕緣（尖端除外，尖端直徑約100μm）的鋼絲構(gòu)成，尖端相距約0?3mm，插入位點(diǎn)在海馬穿通纖維角狀束，相對(duì)
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