仔豬水腫病的診治

仔豬水腫病的診治

是仔豬較為常見的一種急性、致死性疾病，俗稱為“紅眼病”和“小豬搖擺病”。該病主要發(fā)生于斷奶仔豬，生長快健壯的仔豬較常見，瘦小的仔豬較少發(fā)生。本病發(fā)病突然，病程短，死亡快，給養(yǎng)豬戶帶來了很大的經(jīng)濟損失，是當前發(fā)展養(yǎng)豬業(yè)的一大障礙。病死豬主要剖檢變化為全身淋巴結(jié)切面多汁，水腫出血，特別是胃壁水腫，胃大彎和賁門處水腫明顯，水腫部位變厚，切面可見肌層和黏膜層之間有無色透明的膠凍樣水腫液，胃底彌漫性出血；肺、肝充血水腫；腎包膜增厚水腫；膀胱黏膜輕度出血；胸、腹腔與心包腔以及眼瞼、結(jié)膜、顏面、頸部等全身多處水腫部位都積有透明的或淡黃色液體，液體在空氣中凝結(jié)成膠凍狀[5]。我們從患病仔豬體內(nèi)分離出病原菌，對其進行形態(tài)和生化鑒定、小鼠致病力試驗，鑒定為大腸桿菌。并用紅霉素、四環(huán)素、慶大霉素、頭孢他定等14種抗生素對分離的細菌進行了藥敏試驗。鑒于本病以上和治愈率低的特點，我們利用分離培養(yǎng)的細菌進行增殖培養(yǎng)，并自制了生理鹽水菌液和營養(yǎng)肉湯菌液兩種滅活疫苗。結(jié)果表明菌種在普通瓊脂斜面上生長旺盛，兩種疫苗安檢小鼠全部健活，效力檢驗生理鹽水和營養(yǎng)肉湯菌液組免疫保護率分別達到75%和87.5%。并且滅活疫苗制備工藝簡單，切實可行，疫苗安全性好，保護性強，值得進一步研究�，F(xiàn)將我們的結(jié)果報告如下：

1材料和方法

1.1 患病豬 由萊陽某養(yǎng)豬場提供

1.2 培養(yǎng)基 普通營養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂、伊紅美藍瓊脂、SS瓊脂和三糖鐵瓊脂：購自杭州天和微生物試劑有限公司；營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、吲哚、甲基紅和枸櫞酸鹽利用實驗培養(yǎng)基自行配制。

1.3生化試驗管 葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、鼠李糖、蔗糖、尿素、木糖、麥芽糖、衛(wèi)矛醇、七葉苷：購自杭州天和微生物試劑有限公司

1.4 藥敏試紙 紅霉素(E)、四環(huán)素(TE)、慶大霉素(GM)、頭孢唑啉(CZ)、頭孢他定(CAZ)、萬古霉素(VA)、青霉素(P)、丁胺卡那(AN)、苯唑西林(OX)、呋喃妥因(FM)、氨芐青霉素(AM)、頭孢哌酮(CFP)、阿莫西林(AMC)、環(huán)丙沙星(CIP)：均購自杭州天和微生物試劑有限公司

1.5 動物 健康小白鼠.

2. 實驗方法

2.1 病原的分離和鑒定

2.1.1 取病死仔豬肝臟和腸系膜淋巴結(jié)于普通營養(yǎng)瓊脂、鮮血瓊脂、麥康凱瓊脂、伊紅美藍瓊脂和SS營養(yǎng)瓊脂平板上分離，37.8℃ 24h培養(yǎng)后,選擇麥康凱呈紅色和典型溶血性菌落鑒定。

2.1.2 病原的涂片鏡檢 取病死仔豬肝臟、脾臟、腸系膜淋巴結(jié)涂片，革藍氏和美藍染色鏡檢，取細菌培養(yǎng)菌落用生理鹽水稀釋后涂片，革蘭氏和美藍染色鏡檢。

2.2 生化反應 將初選的可疑菌落純化后分別接種于三糖鐵瓊脂和枸櫞酸鹽利用實驗培養(yǎng)基，吲哚、甲基紅、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、木糖、鼠李糖、甘露醇、山梨醇、衛(wèi)矛醇、尿素反應管內(nèi)，37℃反應48-72h。凡符合于大腸桿菌屬定義者留作抗原鑒定和致病性試驗[2]。

2.3 小鼠攻毒試驗 取血瓊脂上溶血菌落用生理鹽水溶解，測得其濃度為16億/ml，用生理鹽水稀釋為1.6億/ml供攻毒試驗用。實驗組小鼠三只，每只腹腔注射0.1ml菌液，對照組三只，每只腹腔注射0.1/ml生理鹽水，觀察7d，取死亡小鼠的肝臟和脾臟涂片染色鏡檢，并涂布于普通營養(yǎng)瓊脂，血瓊脂和麥康凱瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24h[7]。

2.4 菌種增殖 取麥康凱上呈紅色和典型的溶血菌落，接種于普通瓊脂斜面37℃培養(yǎng)18-24h，4℃冰箱保存，作為一級種子備用。

2.5 藥敏試驗 用滅菌棉試子沾取待檢細菌6h培養(yǎng)物，均勻地涂布在營養(yǎng)瓊脂平板上，然后夾取各種藥物紙片，按一定間隔貼放到瓊脂培養(yǎng)基的表面，置37.8℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18h，觀察抑菌圈直徑大小。

2.6 滅活苗的制備

2.6.1 抗原液的制備 生理鹽水菌液組 取一級種子接種于普通瓊脂平板中，37℃培養(yǎng)18-24h，用滅菌生理鹽水洗下菌苔并混合。

營養(yǎng)肉湯菌液組 取一級種子分別接種于營養(yǎng)肉湯中，37.8℃培養(yǎng)18-24h，做純度檢驗。

2.6.2 純度檢驗和活菌計數(shù) 抗原液制備完成后，取樣用普通瓊脂做純度檢驗，同時進行活菌計數(shù)。

2.6.3 滅活 抗原液按量加入0.3%甲醛溶液，于37.8℃振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。

2.7 疫苗的檢驗

2.7.1性狀檢查

生理鹽水菌液組 疫苗靜止后，下層有少許沉淀，上層為半透明液體，搖動后沉淀懸浮，呈均質(zhì)白色混懸液。

營養(yǎng)肉湯菌液組 疫苗呈棕黃色半透明液體。

2.7.2無菌檢驗 隨機抽檢樣品，分別接種于普通營養(yǎng)瓊脂斜面，鮮血瓊脂板37℃培養(yǎng)48h，檢查無細菌生長。⑴

2.7.3 安全檢驗 注射疫苗后，觀察7天，應正常方可使用，實驗設(shè)計見下表。

表1安全檢驗試驗設(shè)計

組別 注射部位 注射量（ml 小鼠（只）

生理鹽水菌液組 肌肉/皮下 0.2/0.2 3/3

營養(yǎng)肉湯菌液組 肌肉/皮下 0.2/0.2 3/3

2.7.4效力檢驗 20只小鼠，10只每只腹腔注射生理鹽水菌液滅活苗0.2ml，另10只每只腹腔注射營養(yǎng)肉湯菌液滅活苗0.2ml，免疫14d后，連同另10只未免疫對照小鼠每只腹腔注射強毒菌液0.1ml含1.6億/ml，繼續(xù)觀察10-14d[6]。

3結(jié)果

3 病原菌的分離 結(jié)果見表2

表2病原菌分離結(jié)果

培養(yǎng)基 菌落特征

普通營養(yǎng)瓊脂 光滑、灰白、濕潤、圓形邊緣整齊稍隆起的小菌落

血瓊脂平板 有明顯的β溶血環(huán)

麥康凱瓊脂 光滑、濕潤、紅色圓形菌落

伊紅美藍瓊脂 紫黑色帶金屬光澤的圓形菌落

SS瓊脂 紅色的中等大小的菌落

制片染色鏡檢為典型的G－球桿菌。

3.2 常規(guī)生化鑒定結(jié)果 結(jié)果見表3

表3大腸桿菌生化鑒別結(jié)果

培養(yǎng)液（基） 反應結(jié)果 培養(yǎng)液（基） 反應結(jié)果

三糖鐵 鼠李糖

枸櫞酸鹽利用試驗 - 蔗糖 -

產(chǎn)H2S - 甘露醇 ⊕

吲哚 山梨醇

甲基紅 七葉苷 -

葡萄糖 ⊕ 衛(wèi)矛醇 -

乳糖 尿素 -

木糖 麥芽糖

注： ：⊕產(chǎn)酸產(chǎn)氣，培養(yǎng)液（基）變顏色，并有氣泡產(chǎn)生；-無變化，培養(yǎng)液（基）仍為原色； 培養(yǎng)液（基）變顏色。由表3結(jié)果可見，可疑菌的生化反應特性均符合大腸埃希氏菌屬定義，屬于溶血性大腸桿菌。

3.3小鼠攻毒試驗結(jié)果 實驗組小鼠第5天時全部死亡，對照組健康無異常。3.4藥敏試驗結(jié)果 應用紙片法對致病性很強的分離菌進行了14種抗菌藥物的敏感實驗，結(jié)果見表4

表4 藥敏試驗結(jié)果

Table4 The antibiotics sensitivity testing of E.coli

抗生素Antibiotics 抑菌圈直徑（mm）Dia of antibiorobial 結(jié)果判定analysis of result

丁胺卡那 30 高敏

頭孢哌酮 28 高敏

頭孢他定 27 高敏

頭孢唑啉 22 高敏

呋喃妥因 17 中敏

阿莫西林 15 中敏

慶大霉素 12 低敏

四環(huán)素 10 低敏

紅霉素 0 耐藥

萬古霉素 0 耐藥

青霉素 0 耐藥

苯唑西林 0 耐藥

氨芐青霉素 0 耐藥

環(huán)丙沙星 0 耐藥

注：抑菌圈直徑

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