兩種不同離心方法對臍血單個核細(xì)胞回收率的影響

作者：羅偉瓊　李沈容　鄒翠賢　羅小珍　朱美玲
【關(guān)鍵詞】 臍血
　　【摘要】 目的 探討不同離心條件下對臍血造血細(xì)胞回收率的影響。方法 運用6%羥乙基淀粉（HES）沉降，二次離心法可離心臍血濃縮單個核細(xì)胞（MNC），此法具有不受標(biāo)本體積大小的影響、無細(xì)菌污染的優(yōu)點。結(jié)果 通過分析兩種離心方法發(fā)現(xiàn)制備MNC時，離心力與MNC回收率有密切關(guān)系。結(jié)論 加大離心力可增加MNC的回收率。
　　【關(guān)鍵詞】 臍血;造血細(xì)胞/單個核細(xì)胞;離心法;回收率
　　【Abstract】 Objective To investigate the effect of different centrifugal methods on returns-ratio of Mononuclear cell（MNC） in umbilical cord blood.Methods After sedimentated with 6% hydroxyethyl starch（HES）,two centrifugating processes was employed to separate and concentrate MNC,which was not affected by specimen volume and not polluted by bacterium.Results There was significant relationship between different centrifugal force and recovery rate of MNC.Conclusion Recovery rate of MNC will increase by increasing centrifugal force.
　　【Key words】 fetal blood;mononuclear cell;centrifugation;retrieving rate
　　造血干細(xì)胞移植（HSCT）已經(jīng)成為迄今為止醫(yī)治各種惡性血液病、腫瘤、遺傳性疾病、重度放射病及重癥聯(lián)合免疫缺陷等頑癥的最有效方法之一［1,2］，而采用臍血替代骨髓及外周血進(jìn)行HSCT已成為近10年來HSCT領(lǐng)域的最重大進(jìn)展之一［2,3］。最初的臍血HSCT使用的均為未經(jīng)分離的全血，這種全臍血移植雖然能減少造血干/祖細(xì)胞的損耗，但因含有大量的紅細(xì)胞等成熟血細(xì)胞，不但給冷凍保存帶來困難，同時還可能會給移植病人造成嚴(yán)重的不良后果。因此，對臍血庫來講，高效快速分離臍血造血細(xì)胞,對單個核細(xì)胞（MNC）進(jìn)行分離濃縮,最大限度地降低其終體積顯得尤為重要。這不僅涉及到盡量減低造血細(xì)胞的丟失問題，而且還牽涉到降低臍血庫庫容的成本問題。所以，探索出一種行之有效理想的分離方法就成了該領(lǐng)域研究的熱點。為此，筆者做了一些探索，現(xiàn)報告如下。
　　1 材料與方法
　　1.1 材料與儀器 6%羥乙基淀粉（HES）購自美國Dupontpharma公司;無菌、無熱源，含有ACD保養(yǎng)液三聯(lián)采血袋（長春泰爾茂醫(yī)用器具公司）;落地式低溫離心機（SORVALL-PC3C plus）;血細(xì)胞計數(shù)儀：2%冰醋酸結(jié)晶紫染色，計數(shù)有核細(xì)胞數(shù)。
　　1.2 MNC的制備方法
　　1.2.1 臍血來源 40份臍血均無菌，采自深圳市寶安區(qū)西鄉(xiāng)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，均為足月產(chǎn)，胎兒無窒息。供者均為身體健康、發(fā)育良好的非高齡產(chǎn)婦。
　　1.2.2 分離提取 將采集的臍血留樣1ml用計數(shù)儀將MNC計數(shù)。參照紐約臍血庫操作規(guī)程［4］按6%HES∶臍血=1∶5的比例加入，并充分混勻10min,兩次離心法。第一種方法以10℃ 430r/min離心6min做第一次離心；第二種方法以10℃ 460r/min離心6min做第一次離心；利用三聯(lián)袋將上層富含MNC的血漿及少許RBC移入轉(zhuǎn)移袋內(nèi)，去除剩余的RBC，再次以10℃ 1300r/min離心12min。去除上層血漿獲得臍血有核細(xì)胞懸液18~22ml，留樣1ml計數(shù)MNC。
　　2 結(jié)果
　　兩種離心轉(zhuǎn)速與離心時間見表1；兩種離心方法制備MNC獲得率的比較見表2。
表1－表2 （略）
　　3 討論
　　臍血與骨髓及外周血相比有諸多優(yōu)點［5~7］：富含更原始的造血細(xì)胞，增殖能力強；可進(jìn)行HLA 1~3個抗原不合的同胞或無關(guān)者的移植；單份臍血中的造血細(xì)胞量可滿足65%的兒童（

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