- 相關(guān)推薦
綠色熒光蛋白標(biāo)記的人血管內(nèi)皮生長因子165基因重組腺病毒載體的
畢業(yè)論文
| 全部作者： | 田衛(wèi)東 白曉峰 |
| 第1作者單位： | 4川大學(xué)華西口腔醫(yī)學(xué)院口腔頜面外科 |
| 論文摘要： | 目的 構(gòu)建攜帶綠色熒光蛋白的高效重組腺病毒載體AdGFP/hVEGF165。方法 應(yīng)用重組腺病毒構(gòu)建系統(tǒng)，以細(xì)菌內(nèi)質(zhì)粒間同源重組法構(gòu)建復(fù)制缺陷型重組腺病毒載體。首先將VEGF165cDNA亞克隆到穿梭質(zhì)粒pAdTrack-CMV上，重組穿梭質(zhì)粒經(jīng)PmeⅠ酶切線性化后，轉(zhuǎn)入已含有腺病毒骨架載體的BJ5183中。同源重組后，重組的病毒質(zhì)粒pAdGFP/ hVEGF165經(jīng)卡那霉素平板篩選獲得。經(jīng)酶切分析鑒定后，重組病毒質(zhì)粒用PacⅠ酶切線性化，通過脂質(zhì)體Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染人胚腎293細(xì)胞。經(jīng)過包裝、擴(kuò)增和純化后，測定病毒滴度。結(jié)果 重組腺病毒質(zhì)粒經(jīng)PacⅠ酶切鑒定，在凝膠電泳中獲得診斷性片段，轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞出現(xiàn)了明顯的細(xì)胞病變效應(yīng)。PCR鑒定括增出測定相應(yīng)的片段。重組腺病毒的滴度為：6×109pfu/m。結(jié)論 應(yīng)用重組腺病毒構(gòu)建系統(tǒng)，以細(xì)菌內(nèi)質(zhì)粒間同源重組法可成功地獲得重組腺病毒載體AdGFP/hVEGF165，重組腺病毒載體中含有GFP的標(biāo)記基因可直觀檢測靶細(xì)胞轉(zhuǎn)染和外源基因的表達(dá)情況，為今后深入研究VEGF基因治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 |
| 關(guān)鍵詞： | 腺病毒載體，血管內(nèi)皮生長因子，同源重組 遠(yuǎn)程下載 論文(免費(fèi)PDF論文全文) |
| 發(fā)表日期： | 2005年06月13日 |
| 同行評議： | （暫時(shí)沒有） |
| 綜合評價(jià)： | （暫時(shí)沒有） |
| 修改稿： |
【綠色熒光蛋白標(biāo)記的人血管內(nèi)皮生長因子165基因重組腺病毒載體的】相關(guān)文章：
超短波對大鼠坐骨神經(jīng)損傷后血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的影響03-08
糖基化終產(chǎn)物對視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞表達(dá)血管內(nèi)皮生長因子的影響03-08
眼底熒光血管造影檢查的護(hù)理配合12-11
探討脾腎與血管內(nèi)皮祖細(xì)胞關(guān)系01-07
基因重組乙肝疫苗免疫效果觀察03-19
綠色熒光蛋白和成肌調(diào)節(jié)因子在骨髓基質(zhì)干細(xì)胞中的共表達(dá)03-21